大肠杆菌中乙醇合成途径的构建.pdf

第 21 卷第 2 期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vol. 21 　No. 2 　 　 　 　　　　 　 2002 年 3 月 Journal of Wuxi University of Light Industry 　 　 　　　　 Mar. 　2002 ( ) 文章编号 :1009 - 038X 2002 02 - 0116 - 04 　 大肠杆菌中乙醇合成途径的构建 谢丽萍 , 　诸葛健 , 　王正祥 (江南大学 教育部工业生物技术重点实验室 ,江苏 无锡 214036) 摘 　要 : 采用 PCR 技术扩增了运动发酵单孢菌 Zymomonas mobilis 的两个产乙醇的关键酶基因 pdc 和 adh Ⅱ,分别克隆到载体 pUC19 和 pUC18 中 ,形成重组质粒 pUC19 : : pdc 和 pUC18 : : adh , 从中分离出两基因并串联到经 Eco R Ⅰ酶切的pUC18 中 ,转化大肠杆菌 E . coli DH5α获得重组质 粒 p PA. 携带 p PA 的重组菌 Pp + a 被证明具有丙酮酸脱羧酶酶活且提高了乙醇脱氢酶酶活. 通过 代谢工程在 Escherichia coli 中成功地构建了乙醇合成途径. 关键词 : 乙醇;重组大肠杆菌 ;代谢工程 中图分类号:O 623. 41 文献标识码 : A Construction of an Ethanol Synthesis Pathway in Escherichia coli XIE Liping , 　ZHU GE Jian , 　WAN G Zhengxiang ( The Key Laboratory of Industrial Biotechnology , Ministry of Education , Southern Yangtze University , Wuxi 214036 , China) Abstract : The two key genes encoded p yruvate decarboxylase and alcohol dehydrogenase Ⅱfor ethanol production were amplified by PCR from the chromosomal DNA of Zymomonas mobilis . The amplified products were digested and inserted into pUC19 or pUC18 to form recombinant plasmid pUC19 : : pdc and pUC18 : : adh , respectively. The recombinant plasmid p PA for ethanol biosynthesis was further constructed by inserting pdc and adh gene from pUC19 : : pdc and pUC18 : : adh into α pUC18 at EcoR Ⅰsite by transforming into E . coli DH 5 . E . coli Pp + a carrying p PA was proved to have activity of p yruvate decarboxylase and high