子宫内膜异位症患者内膜组织中Bcl―2Bax和MMP―2表达及临床意义.doc

子宫内膜异位症患者内膜组织中Bcl―2Bax和MMP―2表达及临床意义 　　【摘要】目的：探讨Bcl-2、Bax和MMP-2在内异症中发生发展的作用。方法：SP法检测子宫内膜异位症76例异位内膜、64例在位内膜和72例正常子宫内膜组织中Bcl-2、Bax和MMP-2的表达。结果：①Bcl-2蛋白表达异位内膜强于在位内膜和对照组；Bax蛋白异位内膜组低于在位内膜组和对照组，均为分泌期差异有统计学意义。②MMP-2异位内膜强于在位内膜组和对照组，增生期差异有统计学意义。③Bcl-2、Bax和MMP-2在对照组及在位内膜组均呈周期性变化：Bcl-2增生期强于分泌期，Bax分泌期强于增生期，MMP-2分泌期高于增生期，异位内膜组失去周期性变化：增生期三组bcl-2表达均强于Bax，异位内膜组、在位内膜组差异有统计学意义；而分泌期对照组和在位内膜组Bax强于Bcl-2，异位内膜组Bax表达较Bcl-2组弱，差异有统计学意义。结论：Bax和Bcl-2、MMP-2之间存在等级相关性，它们可能共同参与子宫内膜异位症的发生发展。 　　【关键词】子宫内膜异位症；Bcl-2、Bax、MMP-2；免疫组织学 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料：所选病例为2007年6月-2011年12月期间就诊于我院妇科，经腹腔镜检查或开腹手术、术后经病理检查证实为EMs者共76例（其中增殖期56例，分泌期20例）为异位内膜组，年龄34.1±5.5岁。同时通过刮宫或切开手术取其在位子宫内膜64例（增殖期40例，分泌期24例）为在位内膜组，年龄35.6±4.1岁。并选择同期子宫肌瘤行子宫切除术72例正常子宫内膜为对照组（增生期48例，分泌期24例），年龄35.0±3.7岁。所有患者无其它内科及内分泌疾病，术前三个月未应用激素治疗，月经周期规律，根据月经周期及病理所见划分增生期和分泌期。所有组织术后立即取材，经10%甲醛固定，石蜡包埋，5μm连续切片5张，1张行常规HE染色进行病理形态学观察，余者用于免疫组织化学染色。 　　1.2方法：（1）主要试剂：Bcl-2、Bax单克隆抗体、鼠抗人MMP-2单克隆抗体、SP免疫试剂盒和山羊血清、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。（2）SP法检测Bcl-2、Bax和MMP-2：切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精至水。采用SP法（Streptavidin Peroxdase Conjugated method）进行免疫组织化学染色。实验操作严格按说明书进行，以0.01MPBS代替-抗作为阴性对照，以已知阳性标本为阳性对照。 　　1.3免疫组化阳性判断标准：Bcl-2、Bax和MMP-2阳性信号为腺上皮细胞浆呈棕黄色着色，MMP-2间质中也有表达。根据文献Krajewska[3]，按半定量的方法评定每一张标本，随机选取高倍镜（×400）下至少5个视野，计数阳性细胞的百分率，并进行计分（0-4分），同时对阳性细胞免疫染色强度进行计分（0-3分），免疫组化染色评分=阳性细胞百分数评分×染色强度评分。0分为阴性（-），1-2分为弱阳性（+），3-4分为中等阳性（++），4分以上为强阳性（+++）。 　　1.4统计学处理：应用SSPS 11.0软件进行统计学处理，秩和检验比较各组间免疫组化结果，Kendall’s W等级相关分析相关性。 　　2 结果 　　2.1 Bcl-2表达情况：异位内膜表达强于在位内膜和对照组，差异有统计学意义。增殖期3组间差异无统计学意义，分泌期异位内膜组表达强于在位内膜和对照组，差异有统计学意义。 　　2.2 Bax表达情况：异位内膜组Bax表达低于在位内膜组和对照组，差异有统计学意义，见表1。在位内膜组和对照组Bax表达呈周期性变化，分泌期强于增生期，差异具有统计学意义、异位内膜组分泌期和增生期差异无统计学意义，见表1。 　　2.3 MMP-2表达情况：异位内膜组MMP-2表达强于在位内膜组和对照组，差异有统计学意义。增生期异位内膜组与在位内膜组和对照组之间差异有统计学意义，分泌期各组内膜之间差异无统计学意义，见表1。对照组和在位内膜组MMP-2表达呈周期性变化，分泌期高于增生期，差异有统计学意义，异位内膜腺上皮及间质中增生期和分泌期均呈高表达状态，即异位内膜组失去周期性变化，见表1。 　　3 讨论 　　3.1 凋亡相关基因Bcl-2和Bax在异位症中的作用：凋亡作为一种生理或病理性的细胞消亡，普遍存在于生物界，机体通过凋亡消除衰老的细胞并代之以新的细胞，从而维持组织器官中的细胞数量的稳定。子宫内膜的周期性增生与脱落通过细胞增殖和凋亡形式来实现。凋亡存在于内异症患者在位、异位内膜及腹腔巨噬细胞中，凋亡调节基因Bcl-2和Bax在EMs的发生发展中起主要作用。Bcl-2是一种原癌基