PBS缓冲液的配制方法.doc

PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。 我们实验室的配方： A液：0.1mol/L磷酸二氢钾： 磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。 B液：0.1mol/L磷酸氢二钠： 酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。 或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。 pH －－ A液 （ml） －－ B液（ml） 5.60 －－ 9.50 －－ 0.25 5.91 －－ 9.00 －－ 1.00 6.24 －－ 8.00 －－ 2.00 6.47 －－ 7.00 －－ 3.00 6.64 －－ 6.00 －－ 4.00 6.81 －－ 5.00 －－ 5.00 6.98 －－ 4.00 －－ 6.00 7.17 －－ 3.00 －－ 7.00 7.38 －－ 2.00 －－ 8.00 7.73 －－ 1.00 －－ 9.00 8.04 －－ 0.50 －－ 9.50 一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4?12H2O（磷酸氢二钠） NaH2PO4?2H2O（磷酸二氢钠）Nacl 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可PBS缓冲液 称取NaCl?8g，KCl?0.2g，Na2HPO4?12H2O?3.63g,?KH2PO4?0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB） 试剂： NaH2PO4·2H2O ? ? Na2HPO4·12H2O 配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。 （1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。 （2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2O 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。 （3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0） pH ? 0.2mol/L NaH2PO4(ml) ? 0.2mol/L Na2HPO4(ml) 5.7 ? ? ? ? ? 93.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 6.5 5.8 ? ? ? ? ? 92.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 8.0 5.9 ? ? ? ? ? 90.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 10.0 6.0 ? ? ? ? ? 87.7 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 12.3 6.1 ? ? ? ? ? 85.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 15.0 6.2 ? ? ? ? ? 81.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 18.5 6.3 ? ? ? ? ? 77.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 22.5 6.4 ? ? ? ? ? 73.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 26.5 6.5 ? ? ? ? ? 68.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 31.5 6.6 ? ? ? ? ? 62.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 37.5 6.7 ? ? ? ? ? 56.5 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 43.5 6.8 ? ? ? ? ? 51.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 49.0 6.9 ? ? ? ? ? 45.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 55.0 7.0 ? ? ? ? ? 39.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 61.0 7.1 ? ? ? ? ? 33.0 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 67.0 7.2 ? ? ? ? ? 28.0 ? ?