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犬瘟热病毒N基因原核表达质粒的构建

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犬瘟热病毒N基因原核表达质粒的构建

摘要：犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）是一种高度传染性的病毒，对犬类健康构成严重威胁。CDV的N基因编码病毒的非结构蛋白N蛋白，其在病毒复制和免疫逃逸中发挥重要作用。本研究旨在构建犬瘟热病毒N基因的原核表达质粒，以期为N蛋白的功能研究提供基础。通过PCR扩增N基因，将其克隆至原核表达载体pET-28a，构建表达质粒pET-CDV-N。通过优化表达条件，成功获得高纯度的N蛋白。本研究为CDV的研究提供了新的思路和方法，对预防犬瘟热具有重要意义。

犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）是一种单股负链RNA病毒，属于副粘病毒科。CDV感染犬类后，可引起犬瘟热，是一种高度传染性疾病，对犬类健康和养犬业造成严重威胁。近年来，随着全球犬类数量的增加，犬瘟热疫情呈上升趋势。因此，深入研究CDV的分子生物学特性，对于防治犬瘟热具有重要意义。CDV的N基因编码病毒的非结构蛋白N蛋白，其在病毒复制和免疫逃逸中发挥重要作用。本研究旨在构建犬瘟热病毒N基因的原核表达质粒，以期为N蛋白的功能研究提供基础。

一、引言

1.1CDV的概述

(1)犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）是一种高度传染性的病毒，主要感染犬科动物，包括犬、狐狸、狼和浣熊等。CDV属于副粘病毒科，具有单股负链RNA基因组，病毒粒子呈球形或椭圆形，直径约为150纳米。CDV的感染途径主要包括直接接触、空气传播和间接接触污染的物体等。犬瘟热是一种急性、全身性的疾病，临床表现为高热、呼吸困难、腹泻、呕吐、神经系统症状等，严重时可能导致死亡。

(2)CDV的流行病学特征广泛，全球范围内均有分布，尤其是在犬类集中的地区，如犬舍、狗展、犬类收容所等。CDV感染犬类的潜伏期一般为2-14天，一旦发病，病毒迅速在犬群中传播。犬瘟热不仅对犬类健康造成严重影响，也对人类和其他动物构成潜在威胁。因此，预防和控制CDV感染成为兽医研究和公共卫生领域的重要课题。

(3)CDV的病原学研究表明，病毒基因组分为5个开放阅读框，分别编码病毒的复制酶、结构蛋白和非结构蛋白。其中，非结构蛋白N蛋白在病毒复制和免疫逃逸中发挥关键作用。N蛋白能够与细胞内多种蛋白质相互作用，从而影响病毒的生命周期。近年来，随着分子生物学技术的发展，对CDV的分子机制研究取得了显著进展，为CDV的诊断、预防和治疗提供了新的思路和策略。

1.2CDV的分子生物学特性

(1)犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）的分子生物学特性是研究其致病机制和疫苗开发的关键。CDV基因组全长约15000个核苷酸，包含一个单股负链RNA，由五个开放阅读框（ORFs）组成。其中，ORF1编码病毒复制酶，ORF2至ORF5分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白。研究显示，CDV的基因组具有高度保守性，但其变异率在不同宿主之间和不同流行株之间存在差异。例如，在犬瘟热病毒的自然感染中，病毒的基因突变率约为0.1-0.5%。在2000年至2007年的美国犬瘟热疫情中，通过对CDV基因组的分析，发现流行株之间的核苷酸差异约为5-10%。

(2)CDV的复制酶（ORF1）是病毒复制的关键酶，由两个亚基组成，即大亚基（L）和小亚基（P）。大亚基L负责病毒RNA的合成和加工，而小亚基P则参与病毒RNA的合成和转录。研究表明，L亚基的活性受到P亚基的调节。在小亚基P缺失的突变株中，病毒的复制能力显著降低。此外，CDV复制酶还受到宿主细胞因子的调控。例如，干扰素γ（IFN-γ）可以抑制CDV复制酶的活性，从而降低病毒的感染能力。在实验研究中，通过添加干扰素γ可以显著降低CDV感染犬肾细胞（MDCK）的病毒滴度。

(3)CDV的结构蛋白包括F蛋白、H蛋白、L蛋白和M蛋白，它们共同构成病毒粒子。F蛋白是CDV的主要表面糖蛋白，负责病毒与宿主细胞表面的受体结合，启动感染过程。H蛋白和L蛋白分别构成病毒粒子的壳和基质，而M蛋白则与病毒粒子的组装和释放密切相关。研究发现，F蛋白的突变可以影响病毒的感染能力。例如，在H5N1禽流感病毒中，F蛋白的突变可以提高病毒在哺乳动物细胞中的感染性。在CDV的疫苗研究中，通过基因工程改造F蛋白，可以提高疫苗的免疫原性。此外，L蛋白和M蛋白的突变也可能影响病毒的致病性和传播能力。例如，在2004年的美国犬瘟热疫情中，病毒株的L蛋白突变与病毒的高致病性有关。

1.3N蛋白在CDV生命周期中的