血细胞分析仪简介作者陈宏础陈宏础20世纪50年代库尔特WH.DOC

血细胞分析仪简介作者：陈宏础 ?????????????????????????????????陈 宏 础????20世纪50年代，库尔特（W. H. Coulter）先生根据血细胞不良导体的特性，以电解质溶液中悬浮细胞颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化(即电阻抗原理，又称库尔特原理)，产生脉冲再经仪器放大、甄别、整形、计数，生产出第一台血细胞计数仪，开创了血细胞分析仪的新纪元，使人工计数实现自动化。随着科学技术的发展，血细胞分析仪也日新月异，目前己普及至县或卫生院，现将常用血细胞分析仪的基本测定原理、校准及质量管理介绍如下。一、血细胞分析仪原理简介（一）红细胞和血小板参数检测原理????由于库尔特原理不但能进行血细胞计数，而且可以同时测定每个细胞体积。血液经较高倍数的稀释后，正常情况下白细胞所占比例较少，可以忽略不计，通过血细胞分析仪计数和细胞体积大小处理，即可获得RBC、PLT数量和MCV、MPV及RBC和PLT体积分布直方图。如仪器中再引入血红蛋白测定系统。通过RBC、Hb、MCV的实测数据，自动计算出HCT、MCH、MCHC、RDW等参数。有的仪器采用流式细胞术加二维激光散射法检测RBC及PLT。全血经专用稀释液稀释后，使自然状态下的双凹盘状扁圆形红细胞成为球形并经戊二醛固定，这种处理并不影响红细胞的平均体积。红细胞通过测量区时，激光束以低角度前向光散射测量单个红细胞的体积和红细胞总数，同时用高角度光散射测量每个红细胞内血红蛋白浓度。同样原理可测定每个血小板的大小、数量和密度，使红细胞及血小板计数更加准确。（二）网织红细胞参数检测原理????有的仪器除了进行全血细胞计数外，还利用流式细胞术进行网织红细胞计数。先将荧光染料（或新亚甲蓝）与网织红细胞内RNA结合，通过相应激光束时，仪器同时测量前向散光强度和荧光强度，分别反映细胞体积大小和胞浆内RNA多少，构成二维显示散点图。将网织红细胞分成低荧光强度（low fluorescent reticulocyte，LFR）、中荧光强度（middle fluorescent reticulocyte，MFR）和高荧光强度（high fluorescent reticulocyte，HFR）网织红细胞。幼稚网织红细胞荧光最强。反之，成熟红细胞极少或没有荧光。仪器还可提供网织红细胞绝对数及网织红细胞成熟指数（reticulocyte mature index，RMI）。RMI增高与骨髓移植、慢性溶血、近期出血或疗效反应有关；RMI降低通常提示骨髓衰竭或无效造血。（三）白细胞参数检测原理????白细胞计数是利用溶血剂将一定倍数稀释的血液中红细胞溶解，而白细胞胞浆也经胞膜渗出，胞膜紧裹在细胞核和存在的颗粒周围，使白细胞成为“膜包核”状态被保留下来。利用电阻抗原理经小孔计数出白细胞数量及体积测定，通过白细胞体积分布直方图，将白细胞大小进行分群，即当今的二分群、三分群血细胞分析仪。另一种类型血细胞分析仪是利用流式细胞术和光散射原理。首先将血液进行稀释，在鞘流液的作用下，形成细胞流，细胞排列成单列通过光学检测区，引起光散射变化，获得脉冲信号。信号大小与细胞体积有关，以此来进行白细胞计数及体积大小测定。（四）白细胞五分类检测原理????要进行白细胞分类计数，必须对每个细胞进行多参数的测量，综合分析测得数据，才能做出五分类计数。现作简要介绍，详细请参阅有关生产厂家说明书。1.容量、传导、光散射（volume??conductivity??scatter，VCS）分类法：首先将血液稀释标本加入只作用红细胞的溶血剂，使红细胞溶解破坏，而白细胞基本保持完整状态，利用流式细胞术使白细胞单个通过检测器，接受VCS三种技术同时检测。即利用电阻抗法测量细胞体积（volume，V）大小；传导性（conductivity，C）是采用高频电磁波测量细胞内部结构，如细胞核、浆的比例，细胞内颗粒的大小和密度；光散射（scatter，S）是利用激光对每一个细胞进行扫描分析，区别细胞颗粒的构型和颗粒质量。根据三种方法测定数据经计算机处理进行白细胞五分类。2 .阻抗、射频和特殊稀释液处理的联合分类法：这类仪器是通过四个不同检测系统完成的。（1）嗜酸性粒细胞检测系统：将血液与嗜酸性粒细胞特殊稀释液混合，使嗜酸性粒细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整的嗜酸性粒细胞的稀释液通过小孔，用电阻抗法进行计数。（2）嗜碱性粒细胞检测系统：也是用特殊的嗜碱性粒细胞稀释液处理后再计数。（3）淋巴、单核、粒细胞（包括中性、嗜酸性、嗜碱性）检测系统：采用电阻抗和射频联合检测。（4）幼稚细胞检测系统：基于幼稚细胞膜上脂质较成熟细胞少的现象，在细胞悬液中加入含硫氨基酸，使幼稚细胞膜上结合