DB22T 2922-2018 鸡传染性支气管炎病毒检测 荧光RT-PCR法.pdf

ICS11.220

B41

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2922—2018

鸡传染性支气管炎病毒检测

荧光RT-PCR法

DetectionofchickeninfectiousbronchitisvirusReal-timePCRmethod

2018-11-12发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T2922—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：呼延含蓉、程荣华、柴方红、张淑莹、王楠、于钦磊、高春生、吴丹、孙亮、

马晓媛、卢松岩、付瑶、王建超、陆伟、何浩、傅国群。

I

DB22/T2922—2018

鸡传染性支气管炎病毒检测荧光RT-PCR法

1范围

本标准规定了鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测方法的材料、操作步骤和结果判定。

本标准适用于鸡传染性支气管炎的诊断、监测及流行病学调查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3材料

3.1仪器设备

3.1.1干热灭菌箱。

3.1.2高压蒸汽灭菌器。160℃。

3.1.3冰箱，2℃~8℃,-20℃和-80℃三种。

3.1.4恒温水浴锅，控温范围为室温至100℃。

3.1.5可调移液器，最大量程为10μL，200μL，1000μL。

3.1.6高速冷冻离心机，12000r/min以上。

3.1.7荧光定量PCR扩增仪。

3.2器械与耗材

3.2.1医用棉签。

3.2.2医用剪刀，16cm。

3.2.3医用镊子，16cm。

3.2.41.5mL离心管，15mL离心管，50mL离心管。

3.2.5组织匀浆器或研钵。

3.2.6吸头，10μL，200μL，1000μL。

3.2.7荧光PCR管。

3.3试剂

除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。

3.3.10.02mmol/LPBS，见附录A。

3.3.2RNA提取试剂盒。

3.3.3荧光RT-PCR反应液。

3.3.4灭菌双蒸水。

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DB22/T2922—2018

3.3.5阳性对照，鸡传染性支气管炎病毒S1基因序列片段，见附录B。

3.4引物和探针

3.4.1引物和探针序列见表1。

表1引物和探针序列

名称序列

上游引物F5-ATCCTTTTATTAATAGT