GB/T 36852-2018亚洲梨火疫病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36852-2018 亚洲梨火疫病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Erli切ia pyrifol iae 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/T 36852-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布结构不承担识别这些专利的责任。 本标准向全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提归井归I Io 本标准起草单位：中同检验检疫科学研究院、南京农业大学、中华人民共和同上海出入境检验检疫 局、湖江大学、中华人民共和同烟台出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：赵文军、回茜、胡白石、田地丽、易建平、楼兵干、李红叶、葛泉卿。 I GB/T 36852-2018 附录 C （规范性附录） 实时荧光PCR 检测 C.1 引物及探针序列 Ep- hrpwF , 5- CGCTAACCCGACTGTGCT斗’ Ep-hrpwR: 5’ - T GAAGGTTTGCCCTTTGC- 3 Ep-hrpwP:5CFAM) -ATGACACCATCATCGTAAAGGCGG-CTAMRA)3 ’ C.2 实时荧光PCR 反应体系及程序 20 /tL 反应体系： 2 × Premix Ex Taq 10 µL，引物(10 µmol/L）各 1 µL，探告l·OO µmol/L)0 .5 µL，模 板 1 µL，补充超纯水至 20 µLo 实时荧光PCR 反应程序： 第一个循环为 95 °C 5 min；随后 40 个循环，95 ℃ 10 日， 60 ℃ 30 S 0 注： 不同仪锵可根据仪器要求将反应参数作适当调整。 C.3 结果判定 在阳性对照Ct 值ζ34 ，阴性对照和空向对照的 Ct 值二三40 前提下： 一一如果检测样品的Ct 值《35 时，则判定为阳性； 一一如果检测样品的 Ct 值注40 时，则判定为阴性； 如果 35Ct 值＜40 时，则应重新测试，如果重新测试的 Ct 值注40 时， 则判定为阴性，如果重 新测试的Ct 值＜40 时， 则判定为阳性。 9 GB/ T 36852-201 8 参考文献 [ l] EPPO, 2004 .EPPO Standards :Diagnostic protocols for r egulated p es