GB/T 36851-2018辣椒细菌性斑点病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36851-2018 辣椒细菌性斑点病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Xanthomonαs vesicαtoria 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/T 3685 1-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准向全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提归井归I Io 本标准起草单位：中同检验检疫科学研究院、中华人民共和同绥芬河出入境检验检疫局、中华人民 共和同甘肃巾入境检验检疫局、中同农科院生物技术研究所、中华人民共和同山东阳入境检验检疫局。 本标准主要起草人：回茜、张箭、尤波、王溪桥、赵文军、李为民、历艳。 I GB/T 3685 1-20 18 杆菌肤（bacitracin) 0 . 1 g 硫酸新霉素（neomycin sulfate) 0 .0 1 g 称取所有的试剂 A组分到适宜的容器中，加入 990 mL 蒸倔水，1 21 ℃，高压灭菌 15 mino 将培养 基冷却到45 ℃～50 ℃，加入试剂 B。 9 GB/T 36851-2018 附录 C （规范性附录） PCR ，疑胶电泳检测方法 C.1 引物序列 Bs-XvF :5-CCATGTGCCGTTGAAATACTTG -3 Bs-XvR: 5-ACAAGAGATGTTGCTATGATTTGC斗’ C.2 PCR 反应体系及条件 25 vL 反应体系：2 × PCR 反应预渴液 12. 5 vL，引物 Bs-XvF (10 ,umo l/L) 1 vL，引物 Bs-XvR (10 vmol/L) 1 vL，模板 1 µL，补充超纯水至 25 µL。 PCR 反应程序： 94 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s, 64 ℃ 30 日， 72 ℃ 30 s ,40 个循环；72 ℃ 10 min; 4 ℃保存。 注．不同仪稽可根据具体要求将反应参数作适当调整。 C.3 琼脂糖凝胶电泳 制备 2 %的琼脂糖凝胶，按比例棍匀电泳上样缓冲液和 PCR 扩增产物，用 DNA Marker 作为分子 量标记，进行电泳分析，电泳结束后在凝