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大鼠ACE基因打靶载体的构建及ACE敲入细胞模型的制备的开题报告

1.研究背景

高血压是一种常见的心血管疾病，其患病率和死亡率逐年上升。Angiotensin-converting-enzyme（ACE）是肾素-血管紧张素系统（RAAS）的关键成分之一，在高血压的发病机制中发挥着重要的作用。大鼠ACE基因的敲入可以有效地模拟人类血管系统中ACE的表达和调控，从而提供了一种理想的研究高血压发病机制的模型。

2.研究目的

本研究旨在构建大鼠ACE基因敲入载体，并利用该载体制备ACE敲入细胞模型，从而为研究ACE在高血压发病机制中的作用提供一个合适的实验平台。

3.研究方法

3.1构建大鼠ACE基因敲入载体

采用基因克隆技术，将大鼠ACE基因的启动子、exon1、intron1、exon2及一部分intron2序列克隆到质粒载体中，构建大鼠ACE基因敲入载体。同时，在敲入载体上加入Neo和tk荧光蛋白基因，用于筛选敲入细胞和鉴定纯化细胞。

3.2ACE敲入细胞模型的制备

将敲入载体转染到大鼠肺间充质细胞（RPMCs）中，利用G418和ganciclovir筛选和纯化ACE敲入RPMCs细胞株。通过PCR和Westernblot检测敲入细胞中ACE基因的表达水平以及其对RAAS通路的影响，评估建立的ACE敲入细胞模型的可行性和有效性。

4.预期结果

本研究将成功构建大鼠ACE基因敲入载体，并利用该载体制备ACE敲入RPMCs细胞株，建立一个可用于研究ACE在高血压发病机制中作用的细胞模型。同时，预期通过PCR和Westernblot检测敲入细胞中ACE基因的表达水平以及其对RAAS通路的影响，进一步探究ACE调节机制与高血压之间的关系。

5.实验意义

本研究将为探索ACE在高血压发病机制中的作用提供一个合适的实验平台，为进一步研究高血压的发病机理和寻找有效的预防和治疗高血压的方法提供一定的理论基础。