奥消唑氯化钠注射液无菌方法验证(100ml：0.5g.docx

四川科伦药业股份有限公司奥硝唑氯化钠注射液无菌检查方法验证1、样品：奥硝唑氯化钠注射液 规格：100ml：奥硝唑0.5g与氯化钠0.9g批号：K120415052、培养基：硫乙醇酸盐流体培养基 批号 1111292 改良马丁培养基 批号 1104192 营养肉汤培养基 批号 090922 营养琼脂培养基 批号 1012023、仪器及用具：LDZX–40SCI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），HTY–2000A集菌仪（杭州泰林医疗器械有限公司），KSF330集菌培养器（杭州高德泰林医疗器械有限公司）4、冲洗液：0.1%蛋白胨溶液5、验证试验用菌种（第三代）CMCC系列——金黄色葡萄球菌（26003）铜绿假单孢菌（10104）枯草芽孢杆菌（63501）生孢梭菌（64941）大肠杆菌（44102）白色念珠菌（98001）黑曲霉菌（98003），菌种均由四川省食品药品检验所提供。6、菌液制备：取经35℃培养24小时的大肠埃希菌、金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌的新鲜培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成每1ml含菌数约为50～100cfu的菌悬液。取经25℃培养24小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成每1ml含菌数约为50～100cfu的菌悬液。取经35℃培养24小时的生孢梭菌硫乙醇酸盐液体培养物1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成每1ml含菌数约第1页共3页为50～100cfu的菌悬液。取经25℃培养7天的黑曲霉斜面培养物，加入10ml 0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，吸至无菌试管内，取1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6，制成每1ml含孢子数约为50～100cfu的孢子悬液。7、方法验证7.1供试液的薄膜过滤法取KSF330集菌培养器一幅，用小夹夹闭与其中一侧滤器相连的导管，在约50ml的0.1%蛋白胨溶液中加入已计数好的实验菌液1ml，按薄膜过滤法过滤，再将100ml相应的培养基加至封闭式薄膜过滤器内，作为菌液对照管。然后松开小夹后再夹闭另一侧导管，先过滤约100ml的0.1%蛋白胨溶液使滤器润湿，取供试品10瓶（供一株试验菌用），按薄膜过滤法将样品进行过滤，再用0.1%蛋白胨溶液冲洗，每次冲洗约50ml，在最后约50ml的0.1%蛋白胨溶液中加入已计数好的实验菌液1ml同法过滤，将100ml相应的培养基加至封闭式薄膜过滤器内，作为供试品管。 各实验菌同上法操作，按规定的温度培养5天，每天观察并记录结果。7.2阴性对照取KSF330集菌培养器一幅，两罐体分别过滤0.1%蛋白胨溶液各100ml，然后分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml，按规定的温度培养5天，每天观察并记录结果。8.验证试验结果供试品管及对照管结果如下，阴性对照管在规定时间内没有菌长出。第2页共3页结果如下：供试菌供试品管培养时间1 2 3 4 5（天）对照管培养时间1 2 3 4 5（天）金黄色葡萄球菌－ － + + +－ + + + +铜绿假单孢菌－ + + + +－ + + + +枯草芽孢杆菌－ － + + +－ + + + +大肠杆菌－ + + + +－ + + + +生孢梭菌－ － + + +－ + + + +白色念珠菌－ + + + +－ + + + +黑曲霉－ + + + +－ + + + +9、结论：根据上述验证结果，将供试品奥硝唑氯化钠注射液按薄膜过滤法过滤后，当冲洗量不少于300ml/膜时，所有试验菌均在规定的时间内长出，且生长良好。因此，本品无菌检查按照中国药典2010年版二部无菌检查法（附录XIH）中的薄膜过滤法进行，冲洗液为0.1%蛋白胨溶液，冲洗量为不少于300ml/膜，根据供试品特性，选用生孢梭菌为阳性对照菌。10、无菌检查法取本品，按中国药典2010年版二部无菌检查法（附录XIH）中的薄膜过滤法检查，以0.1%蛋白胨溶液冲洗，冲洗量不少于300ml/膜，以生孢梭菌为阳性对照菌，应符合规定。第3页共3页