白英诱导大肠癌HT29细胞凋亡作用及其机制研究.pdf

． 实≈验 研 究 i i ii 白英诱导大肠癌 HT29细胞凋亡作用及其机制研究 万春霞 1 赵凤达 ： 万福生 杨香 生 黄 国栋 (1．武警江西总队医院，江西南昌330006；2．南昌大学第一附属 医院，江西南昌330006； 3．南昌大学医学院，江西南昌330006) 摘 要 目的：探讨 白荚水提取液对人大肠癌 HT29细胞增殖的影响并探讨其诱导凋亡作用机制。方法 ：采用MTr法 检测白英水提取液对人大肠癌 HrI’29细胞 的增殖抑制作用 ，普通光学显微镜及 电镜观察细胞形态学变化 ，Annexin—VP／I双 染法流式细胞术分析细胞早期凋亡率的变化 。结果：白英水提取液可显著抑制人大肠癌 HT29细胞增殖 ，且呈一定的剂 量和时间依赖性：光镜下见细胞体积缩小，细胞增殖减慢 ；电镜下见细胞染色质明显浓缩，核聚集等典型的凋亡特征；流 式细胞术证实细胞凋亡率明显升高。结论 ：白英水提取液对人大肠癌 HT29细胞 的增殖具有明显的抑制作用，其机制与 诱 导细胞凋亡相 关。 关键词 白英 水提取液 大肠癌细胞 细胞凋亡 体外实验 中图分类号 R282．71 文献标识码 A 文章编号 1672—397X(2011)10—0083—03 大肠癌是人类高发 的恶性肿瘤 ，其发病率和死亡率逐年 养人大肠癌 HqE9细胞 ，细胞生长至对数增殖期 。正常对照组 上升 ，严重危害人类健康 。大肠癌 的治疗方法主要有外科手 不加任何药物 ．继续用含 l0％胎牛血清 的DMEM 培养液培 术治疗 、化学治疗 、放射治疗 、中医药治疗和生物治疗等 。近 养 。药物处理组更换含不同浓度的白英水提取液和羟基喜树 年来 ，大肠癌 的治疗 已取得 了较大的进步，草酸铂、伊立替 碱 的培养液 ，药物作用时间为 24～72h。 康 、卡培他滨等新型细胞毒药物 已经应用于临床 ll【，但探求高 1．5 MT]r实验 取对数生长期的细胞 ，消化后重悬 ，以每孑L 效 、低毒 、经济 的化疗药物仍是许 多学者坚持不懈 的追求 目 4x10个细胞接种至无菌 96孔板 内，继续培养24h。弃掉孔 内 标。中药 白英 (Solarium ~,num Thunb)为常用抗癌 中草药， 原培养液 。加入含不 同浓度 白英水提取液和羟基喜树碱 的 临床常用于肺癌 、食道癌 、胃癌 、肝癌 、肠癌等多种癌症 。本研 DMEM 培养液 2001xL。每组药物浓度设 4个平行复孔 ，同时 究通过体外细胞培养 ．观察 白英对大肠癌细胞 的增殖影 响， 设置不含药物 的空 白对照孔 ，继续培养 24h、48h、72h，到终止 探讨其诱导凋亡的机制 ，旨在确认 白英对消化道肿瘤的抗肿 培养前 4h，每孔加入 MIrr(5mg／mL)20p,L，继续培养 4h，弃去 瘤作用效果。以及为其临床应用提供实验依据。 培养液 ，每~LJJU入 DMSO 150txL，用震荡混合仪震荡 10min， 1 材料与方法 使 甲瓒结晶充分溶解，酶联检测仪上检测 490nm波长下每孔 1．1 实验用品和试剂 人大肠癌 HT29细胞株 由中科 院上 的0D值。按公式计算细胞生长抑制率 (IR)：抑制率(％)：(卜 海 细胞 生物研究所细胞库提供 。白英 ，江西江 中中药 饮片有 实验组OD值，正常对照组OD值)×1o0％。实验重复3次，取 限公司．批号经南昌大学第一附属医院中药房徐 其平均值 。 晓华副主任药师鉴定为真品；羟基喜树碱 ，深圳万乐药业有 1．6 细胞 形态学观察 采 用普通光学显微 镜观察 细胞加药 限公司，批号 DMEM培养基 ，GIBCO公司 (美 前后 的生长情况 。电镜观察 白英水提取液对 HT29细胞超微 国)；胎牛血清 ，杭州四季清公司；四甲基偶氮唑蓝 (MTr)、二 结构的影响。将对数生长期的细胞消化成单细胞悬液 ，稀释