真海鞘壳化学成分分离及其浸膏抑制人肝癌细胞HepG活性的研究-畜牧渔业论文.doc

真海鞘壳化学成分分离及其浸膏抑制人肝癌细胞HepG2活性的研究-畜牧渔业论文 真海鞘壳化学成分分离及其浸膏抑制人肝癌细胞HepG2活性的研究 翟兴月1，侯秀秀2，佟长青2，杜影3，李伟2 （1.大连医科大学附属第二医院临床营养科，辽宁大连116023； 基金项目：海洋局公益性行业科研专项（项目编号201205022-7）。 作者简介：翟兴月（1982-），女，主治医师，研究方向为食品营养。 通讯作者：佟长青，男，副教授，E-mail：[emailprotected]；李伟（1964-），男，教授，Tel：0411E-mail：[emailprotected]。 DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2015.07.006 2.大连海洋大学食品科学与工程学院，辽宁大连116023；3.大连市疾病预防控制中心，辽宁大连116021） 摘要：采用硅胶柱色谱及薄层制备色谱等手段从真海鞘（HalocynthiaroretziDrasche）壳中分离纯化出了3种化合物。对所获得的化合物经过理化性质、波谱分析和文献对照的方法进行了结构鉴定。同时，采用CCK-8方法对75%EtOH浸提所获得的真海鞘壳浸膏进行了抑制人肝癌细胞HepG2生长测试。结果表明，从真海鞘壳中分离得到3种化合物分别为：Diethyl24-[（Z）-3-methy-1-hexenyl]-heptatetracontanedioate（化合物1）、胆甾醇（化合物2）和6-（2，，3，-Dihydroxy-4，-hydroxymethyl-tetrahydro-furan-1，-yl）cyclopentadiene[c]pyrrole-1，3-diol（化合物3）。体外测试表明，75%EtOH浸提所获得的真海鞘壳浸膏具有显著抑制人肝癌细胞HepG2生长的活性，可作为潜在的抗肿瘤药物进行进一步研究。 关键词 ：真海鞘；化学成分；结构鉴定；人肝癌细胞HepG2 真海鞘（HalocynthiaroretziDrasche）主要分布于日本的海男鹿半岛以北的海域及韩国的东海岸和南海岸[1]。真海鞘可食部分含有丰富的营养成分，味道鲜美，深受人们的欢迎。李春艳等研究了真海鞘的营养价值，发现其可食部分除了含有丰富的氨基酸及矿物质以外，还含有丰富的必需不饱和脂肪酸[2]。近年来，辽宁和山东进行了真海鞘的引进和养殖，目前已经形成一定的规模化养殖[3]。真海鞘体外是呈橙红色具有很多乳头状突起的被囊（壳），是不可食部分，目前大多被当成废物废弃[1]。 ）海洋生物生活环境与陆生生物的生活环境不同。海洋生物生活环境往往更加极端，如高盐、高压环境，它们为了适应这样的生活环境，往往产生一些特殊结构的代谢中间产物。海洋生物所含有的特殊结构的代谢中间产物往往又成为潜在的药源生物活性物质。对真海鞘壳化学成分的研究未见报道。本研究中，对真海鞘壳化学成分分离及其浸膏抗肿瘤活性进行了研究，旨在为真海鞘壳的开发利用提供基础数据。 1材料和方法 1.1材料 ）真海鞘（HalocynthiaroretziDrasche）2013年10月于山东省威海市荣成寻山集团采购；人肝癌细胞HepG2来自中国科学院上海细胞库；D101大孔吸附树脂柱购于天津市海光化工有限公司；硅胶（20～300mesh，10～40μm）及薄层层析硅胶（SilicagelforThin-layerChromatography，HG/T2354-92）购于青岛海洋化工有限公司；SephadexLH-20葡聚糖凝胶购于Sigma公司；CCK-8检测试剂盒（Dojindo，CK04）来自株式会社同仁化学研究所；其他试剂为国产分析纯。 1.2方法 1.2.1真海鞘壳浸膏的制备真海鞘壳（湿重21kg）洗去泥沙，剪成约2cm×2cm的小块，置于圆底烧瓶中，加入3倍量的75%EtOH，加热回流提取2h，提取3次，制成浸膏并称重，放入冰箱中冷冻保藏备用。 依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对提取到的浸膏进行3次萃取，浓缩，分别得到石油醚萃取部分（9g）、乙酸乙酯萃取部分（13g）和正丁醇萃取部分（16g）。 1.2.2真海鞘壳化学成分的分离将石油醚萃取部分9g溶于适量的石油醚中，在石油醚溶液中加入15g的300～400目硅胶并搅拌均匀，挥发溶剂使样品充分吸附。用100g300～400目硅胶进行湿法装柱（2.5×70cm），先用石油醚平衡，将混有石油醚萃取部分硅胶加入到柱的上层，用石油醚：乙酸乙酯（100∶1-100∶100）的洗脱液进行梯度洗脱，每个比例进行5个柱体积的洗脱，分别收集洗脱液（每组分约600mL）。通过薄层层析法跟踪检测每个组分，并通过显色结