MarcanineA晶体解析和抗肿瘤活性研究.doc

Marcanine A晶体解析和抗肿瘤活性研究 摘 要：从海南药用植物斜脉暗罗茎中分离得到一个黄色的晶体，经1D,2D-NMR确定其结构为Marcanine A，采用X-ray衍射的方法确定其晶体结构，确定其属于Triclinic晶系，P-1空间群，Z = 2，晶胞参数：a = 5.2140(5)?, b = 10.1871(11)?, c = 11.0709(13)?, α = 110.452(2)o,β=103.376(2)°,γ= 90.1870(10)°, V = 533.74(10)?3, 每个晶胞中含有3个分子间氢键。另外，采用MTT法测定其对人体肿瘤细胞的抑制作用，发现对BEL-7402, K562, SPCA-1 SGC-7409四种肿瘤细胞有较好的抑制作用，其中SGC-7409抑制作用非常好，IC50=1.53μM. 关键词：Marcanine A，晶体结构，抗肿瘤活性 1.简介 番荔枝科（Annonaceae）暗罗属(Polyalthia genus) 植物斜脉暗罗（Polyalthia plagioneura）系我国特有种，分布于云南、广东、广西南部及海南[1]。目前，从其中分离出来的化合物仅有2种，分别为howiicin A 和 plagionicin[2,3]，本文报道了从斜脉暗罗茎中分离得到一个单体化合物marcanine A（Figure 1）X-ray晶体衍射的方法分析确定了其晶体结构，该化合物是首次从暗罗属植物中分离得到。 marcanine A具有很好的生物活性，Soonthornchareonnon等.[4]报道了marcanine A具有很好的抑制人体肿瘤细胞的作用，他对A-549, HT-29, MCF7, RPMI和U251这5种肿瘤细胞的半抑制浓度非常小，介于80 nM 到 2.1 μM之间。Ichino等[5]发现marcanine A具有很好的治疗疟疾的作用，对于具有很强抗药作用的疟原虫Plasmodium falciparum也具有很强的抑制作用。 Figure 1. Chemical structure of marcanine A. 2.实验部分 2.1. 植物来源 斜脉暗罗药材采自海南昌江县霸王岭自然保护区，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴定为番荔枝科暗罗属植物Polyalthia plagioneura。标本现存于海南师范大学“省-部共建”热带药用植物化学教育部重点实验室。 2.2提取分离 斜脉暗罗茎置于干燥通风处自然阴干，取20kg粉碎后用75%的乙醇在60°C时提取4次，每次3小时，合并提取液，减压浓缩回收溶剂，得粘稠状棕色浸膏520 g；将浸膏分散在3000 mL蒸馏水中，依次用等体积的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取数遍，减压浓缩回收溶剂，得氯仿层（350 g）、乙酸乙酯层（52 g）和正丁醇层（61 g）. 氯仿部位浸膏经过硅胶柱色谱,石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合溶液梯度[石油醚-乙酸乙酯（100:1-1:100），然后乙酸乙酯-甲醇(100:1-1:100)]洗脱。根据TLC检测结果,合并成33份(A1～A33)。A6组分用纯氯仿洗脱得化合物marcanineA。 将化合物marcanineA置于1cm×20cm的试管中，加入20ml氯仿，完全溶解后缓慢挥发溶剂1个月后得到块状晶体。 2.3晶体结构测定 选取0.45mm×0.42mm×0.41mm淡黄色块状单晶置于BurkerSmart-21000 CCDX射线衍射仪上，以石墨单色化的MoKa辐射为光源，λ = 0.71073 ?的波长下，在2.03025.01o范围内，以φ/ω扫描方式，在室温293(2K)下收集2217个独立衍射点，选取I 2σ(I)的1361个可观察到的衍射点进行结构分析。晶体结构由直接法解出，所有的计算均使用SHELTXL-97程序。非氢原子的坐标以数轮差值Fourier合成中陆续确定，全部非氢原子坐标参照各向异性参数进行全矩阵最小二乘法修正。最终偏差因子R=0.041，。R=0.110。测量参数和校正因数见Table 1. 2.4生物活性 2.41细胞培养 人肺腺癌细胞（SPCA-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）和人白血病细胞K562中科院上海生物所提供。细胞含10%胎牛血清、100 μg/m青霉素、100 μg/m链霉素、0.2%NaHCO3的RPMI1640培养液，37°C、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。 MTT比色法[][9] 人肺腺癌细胞（SPCA-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）和人白血病K562分别以2×104、7×104、1×104个/mL接种于96孔板中，每孔体积180 μL，在CO2培养箱内培养(812)h。同时设置空白组(仅