D二聚体的检测方法和临床应用.doc

D-二聚体检测的方法及其临床应用 D-二聚体（D-Dimer,D-D）是交朕纤维蛋白（Fb）特异的降解产物，它的生成或增高反映了凝血和纤溶系统的激活。在全血或血浆中，采用针对D-D的抗体可以很容易地检测D-D含量。近10年来，已建立了多种有价值的D-D的检测方法。早在80年代末90年代初期，人们发现D-D对临床上疑诊为静脉血栓形成（venous thrombo-embolism，VTE）的患者高度敏感，但不特异。在这些患者中，当血浆D-D浓度低于：某一临界值（通常为500μg/l）时，其阴性预测值大于90%，由此可以作为排除VTE的筛选试验。近年来，随着方法学的不断进步，建立多种适用于急诊的简单快速的敏感方法，D-D检测的临床应用越来越广泛。大量研究已经亢分证实了D-D在排除诊断下肢深静脉血栓形成（deepvein thromboembolism，DVT）和肺栓塞（pulmonary embolism，PE）中的应用价值，已将其作为首选筛选指标之一。最近，D-D检测的应用巳深入到弥散性血管内凝血（DlC）、心血管疾病、激素替代治疗、恶性肿瘤以及抗凝治疗领域。一、D-D的生成在各种病理和生理状态下，凝血系统的激活导致Fb的生成，而Fb的生成又可激活纤溶系统，引起纤溶酶（plasmin，PL）的生成和Fb的降解。在交联Fb的降解过程中，生成了一系列的特异降解产物，其中包括D-D（D-Dimer）（图1A，1B）。凝血系统的激活导致凝血酶生成，凝血酶结合于纤维蛋白原的中央结构域，释放纤维蛋白肽A（FPA）和纤维蛋白肽B（FPB），生成纤维蛋白单体和多聚体。在活化FXIII的作用下，生成交联的纤维蛋白。纤溶酶降解交联纤维蛋白，生成多种交联的纤维蛋白降解产物（FbDPs），其中包括D-D和其它的片段。二、D-D的检测方法D-D的检测方法有多种，主要是基于胶乳凝集原理的定性或半定量试验以及基于ELISA原理的定量测定，也有—些方法采用免疫浊度原理或免疫荧光原理。胶乳法灵敏度较低，而经典ELISA法操作费时，都不适合急诊使用。现在已经发展了数种快速的、叮检测单份标本的高灵敏度检测方法。其中应用最广泛、得到临床研究认可的快速检测方法主要有两种：一种是在全血小进行的，只需2分钟就可得到定性结果的试验（自身红细胞凝集，SimpliRed, Agen；金标法Simplify，Agen）；另一种是快速ELISA（VIDASD-D，Biomerieux）。两种快速D-D检测方法与经典检测方法的比较见表1。其他一些快速检测法，无论是基于ELISA原理或是胶乳凝集原理，在推荐用于诊断可疑VTE或其他血栓性疾病前，应进行全面的临床应用评估。对于用于排除诊断VTE的D-D检测方法而言，下列几个指标非常重要：①敏感性；②特异性；③阴性预测值（NPV）：即当D-D水平低于临界值或为阴性时，患者确实不患VTE的可能性；④阳性预测值（PPV）：即当D-D水平高于临界值或为阳性时，患者患VTE的可能性。其中D-D检测方法对VTE的敏感性和NPV是评价该方法至关重要的指标。以下简要介绍几种常用方法的原理和检测特性，比较各种方法的性能，并就目前在D-D检测方法学上的局限性作一分析。（一） 胶乳凝集法1．SimpliRed（Agen Diagnostics Limited，Australia）是目前应用最广泛，性能也得到公认的自身红细胞凝集D-D检测方法。采用分别针对D-D和纤细胞上表位的双抗体，当血中D-D水平升高时，抗原抗体结合的增多而导致红细胞凝集，2分钟内可以判断结果，为半定量的白体红细胞凝集试验。其优点是可在全血中检测，省去了离心制备血浆的麻烦。对VTE的敏感性和NPV分别为81%-89%和90%-94%。如果仅对近端DVT而言，SimpliRed的敏感性和NPV叫更高些，特异性和PPV分别为48%和67%仍不失为一种有价值的筛选高危的近端DVT的方法。2．Liatest定量试验 可在20分钟内完成。临界值为500ng/ml时，其对VTE的敏感性和NPV分别为35%和96%。如果仅对近端DVT而言，其NPV可达100%。 Liatest 与经典ELISA法有很好的相关性（r=0.98）。（二） 快速ELISA法1．VIDAS DD（Biomerieux，France）是一种定量全自动ELISA法，在VIDAS免疫分析仪上进行。它将两步的免疫夹心法与最后的荧光检测结合起来。利用现成的单剂量试剂和分析仪中储存的校准系统，对单份样本进行检测。现成试剂由包被了鼠抗D-D单抗的固相移液装置和一试剂条组成，后者包含了其他所需试剂：结合剂（碱性磷酸酶标记的鼠抗D-D单抗）、洗涤剂、样品稀释剂和底物。将200ul血浆吸入试剂条后，所有步骤由分析仪完成