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抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性研究的任务书

一、研究背景及意义：

HER2（人类表皮生长因子受体2）是一种膜上受体酪氨酸激酶，其过度表达或突变与多种癌症的发生和发展密切相关。目前已经有许多抗HER2单克隆抗体（例如Herceptin）被广泛应用于HER2阳性癌症的治疗，但是存在许多局限性，如获得性耐药、短效性及免疫原性等。为了克服这些缺点，采用抗体-drug结合物治疗已经成为一个热门的领域。其中较为成功的药物是利用HER2单克隆抗体（如Herceptin）与抗肿瘤药物（如doxorubicin、paclitaxel）结合而形成的ADCs（Antibody-DrugConjugates）。

近年来，越来越多的研究将HER2单克隆抗体与细胞毒素连接成一种新的分子药物LCs（ligand-stimulatedcell-penetratingprotein）来克服ADCs的缺点。这种新的分子药物既保留了单克隆抗体的特异性和亲和力，又具有较强的细胞渗透性和毒性，显示出更佳的治疗效果。

因此，本研究旨在构建一种抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的分子药物，并研究其抗肿瘤活性，为HER2阳性肿瘤的治疗提供新途径。

二、研究内容：

1.用基因工程技术构建抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白，并表达在细胞中。

2.精确鉴定融合蛋白的结构，使用FLISA（Fluorescence-linkedimmunosorbentassay）技术测定其与HER2的亲和力。

3.使用细胞毒性实验（MTT实验）来检测抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白对HER2阳性细胞系的毒性。

4.利用小鼠移植瘤模型来评估抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的体内抗肿瘤效果。

5.进行安全性评价，包括血清学和组织学检查，评估其可能的不良反应。

三、研究计划及时间表：

第1年：

1.通过基因工程技术获取抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的基因序列，构建表达载体并转染至CHO细胞中。

2.用SDS分析表达产物，筛选获得表达量较好的细胞系。

第2年：

1.用His-tag亲和纯化法纯化融合蛋白，并进行纯度鉴定和表征。

2.测定融合蛋白与HER2的亲和力，并比较其与Herceptin的亲和力。

3.在HER2阳性细胞系中使用MTT实验检测融合蛋白的毒性。

第3年：

1.建立小鼠HER2阳性移植瘤模型。

2.用小鼠移植瘤模型评估融合蛋白的体内抗肿瘤活性。

3.进行融合蛋白的安全性评价，包括血清学和组织学检查，评估其可能的不良反应。

四、研究预期成果：

1.成功构建抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白。

2.测定融合蛋白与HER2的亲和力，并比较其与Herceptin的亲和力。

3.证明融合蛋白具有对HER2阳性细胞系的较强毒性。

4.证明融合蛋白具有在小鼠HER2阳性移植瘤模型中的较强抗肿瘤活性。

5.对融合蛋白的安全性进行评价，并提供该分子药物在HER2阳性肿瘤治疗中的应用前景。