GB/T 36831-2018松纺锤瘤锈病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36831-2018 松纺锤瘤锈病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Cronartium fusiforme Hedgcock Hunt ex Cummins 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/ T 3683 1-20 18 目u 昌 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由全同植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）提出井归口。 本标准起草单位：中华人民共和同深圳归入境检验检疫局、深圳市检盼检疫科学研究院、中华人民 共和｜司山东归入境检验检疫局、中华人民共和同浙江州入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王颖、程颖慧、日十奕优、余道坚、高瑞芳、章桂明、李芳荣、史亚千、李秋枫、刘新娇、 封立平、陈吴健。 I GB/ T 36831-2018 附 录 D （ 资料性附录） DNA 提取方法 DNA 提取方法如下： a) 将荒玻片切割成 1 mm X l mm 的小块，75 %乙醇浸泡1 h ， 去离子水冲洗3 遍，温热灭菌备用； b) 在解剖镜下挑取5 个～100 个锈菌抱子， 置于七述玻片上，此上力｜］盖另一玻片，用慑子轻压，直 至看见抱子压裂； c) 取 Genomiphi 裂解缓冲液 3 µL 于 PCR 管中，将上述两片玻片同时移入加了裂解缓冲液的 PCR 管中，65 ·ci且浴 10 min ; d) 加入 1 µL 中和缓冲液终止反应； e) 加入 1 µL 陋、4 ,u. L 无菌’水、11 µL 反应缓冲液、1 µL 扩增混合液，30 。c~目育 2 h; o 65 ·c 温浴10 min; g) 加 20 µL TE 恪解DNA。 该核酸制备也可采用各实验室建立的方法。 9 GB/T 36831-2018 参考文献 [ l] h ttp :/ / nt.ars- / fungaldatabases/ index.cfm [ 2] EPPO quarar山ne pest. Cronartium fusiform e, Prepared by CABI and EPPO for the EU un” der Contract 90/ 399003 . [ 3] C . M . I. 1977. Cronartium fusiforme . D istribution Maps of Plant Diseases, No . 475