杞菊地黄丸设计性试验.docx

杞菊地黄丸（浓缩丸）的质量分析 一、实验目的： 1、掌握中药浓缩丸的提取分离方法 2、掌握中药浓缩丸的理化鉴别和含量测定方法 二、实验原理： 【处方】枸杞子40g 菊花40g 熟地黄160g 山茱萸（制）80g 牡丹皮60g 山药80g 茯苓60g 泽泻60g　　 【制法】以上八味，取酒萸肉、牡丹皮、山药粉碎成细粉；泽泻、茯苓加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，滤过，滤液合并浓缩至相对密度为1.30-1.35（60-80℃）的稠膏；熟地黄切片，加水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，滤液合并浓缩至相对密度为1.30-1.35（60-80℃）的稠膏；枸杞子以45%乙醇作溶剂，剩余的酒萸肉与牡丹皮及菊花以70%乙醇作溶剂，浸渍24h后分别进行渗漉，收集渗漉液，合并上述渗漉液，回收乙醇浓缩至相对密度为1.30-1.35（60-80℃）的稠膏；与上述细粉与稠膏混匀，制成浓缩丸，干燥，打光，即得。 【性状】本品为棕色至棕黑色的浓缩丸，味甜而酸 HPLC具有高效、高速和高分辨率的优势。兼有分离和分析的作用，被广泛用于制剂和原料药的有关物质检查以及含量测定，常用外标一点法进行测定。 不同药物中含有不同物质，其药理和特性理化性质不同，可用于对某一种或某一类药物的定性鉴别。 三、实验材料： 器材：高效液相仪 分析天平 塞锥形瓶 冷凝管 研钵 量瓶 剪刀 超声处理设备 回流装置（100ml圆底烧瓶，冷凝管，橡皮管，铁架台，夹子等） 100ml具塞锥形瓶 蒸发皿 60ml分液漏斗等 药品：处方中各类药材 丹皮酚对照品 试剂（甲醇 乙酸乙酯 二氯甲烷 石油醚 无水乙醇 乙醚 丙酮 三氯甲烷 甲酸 甲苯 盐酸 冰醋酸 硫酸 环己烷 三氯化铁 香草醛等） 实验操作： （一） 含量测定：按照高效液相色谱法（2015年版药典一部附录Ⅵ D）测定。 牡丹皮 色谱条件与系统适用性试验： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇—水（70：30）为流动相；检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3500。 供试品溶液的制备：取浓缩丸粉末0.5g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇（70ml甲醇+30ml水）50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过（0.45ìm微孔滤膜），取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ìg的溶液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ìl，注入液相色谱仪，测定，即得。 标准：本品含牡丹皮以丹皮酚（C9H10O3）计，每1g不得少于1.1mg。 阴性对照试验 将供试品溶液，阴性对照溶液（按处方比例称取除牡丹皮外的其他药材同供试品溶液制备条件制备），丹皮酚对照品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。（应该得到三个色谱图）结果阴性应无干扰。 线性试验 分别精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20ìl,按上述色谱条件,测定峰面积。以色谱峰峰面积（y）为纵坐标,对照品进样量(x)为横坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程，相关系数r应不低于0.999。 精密度试验 重复性:分别取同一批供试品,按供试品测定项下方法,重复制备样品6次,进行测定，计算含量平均值，结果用RSD值表示，一般要求RSD％＜3％。 稳定性试验（考察供试品溶液保存的时间） 精密吸取同一供试品溶液10ìl，注入液相色谱仪，按上色谱条件，间隔不同时间0，0.5h、1h、2h、4h进行测定，计算RSD值（≤3%）。 精密度试验（考察仪器的精密度） 精密吸取同一对照品溶液 10 ìl ，注入液相色谱仪，按上条件进行测定，计算RSD值（≤3%）。 中间精密度试验 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员,用不同设备测定结果之间的精密度，结果用RSD值表示，一般要求RSD％＜3％。 重复性试验 对同一批号样品，按照供试品溶液制备方法制备6次，进行测定，计算RSD值（≤3%）。 耐用性试验 液相色谱法典型的变动因素：不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱， 流动相的组成比例的变化，流动相pH值的变化，柱温， 流速，检测波长等。 按上述条件对同一批样品进行测定，计算含量和RSD值（≤3%）。 加样回收率试验 取已知含量的样品5份，每份约1.5g，置烧杯中，加适量丹皮酚对照品，按照供试品溶液制备方法进行处理样品及测定，计算回收率和RSD值（≤3%）。 样品含量测定 取三批样品，各制备5份，按供试品溶液条件进行测定，计算RSD值（≤3%）。 （二）理化鉴别 1. 枸杞子： 含枸杞多糖，又含甜菜碱（betaine）、阿托品、天仙子胺；另含玉