GB/T 17999.6-1999SPF鸡　胚敏感试验.pdf

GB/r17999.6-1999 前 言 禽脑脊髓炎病毒(AEV)感染常用的监测方法有琼脂扩散试验(AGP)和胚敏感试验(ES)二者均可 对AEV感染做出确诊 ES已在我国SPF鸡场的AE监测中得到应用和验证，本标准在此基础上，规定 rSPF鸡胚敏感试验 SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检 测方法 本标准为 《SPF鸡 胚敏感试验》。 SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分: (:B/T17999.1一1999 SPF鸡 红细胞凝集抑制试验; GB/T17999.2-1999 SPF鸡 血清中和试验; GB厂I17999.3-1999SPF鸡 血清平板凝集试验; GB/T17999.4-1999SPF鸡 琼脂扩散试验; GB/T17999.5-1999SPF鸡 酶联免疫吸附试验; GB/T17999.7--1999SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验; (_;ii/,r17999.8--1999SPF鸡 试管凝集试验; GB/T17999.9-1999SPF鸡 H(1接免疫荧光试验 本标准山中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出 本标准由农业部畜牧兽医司归口。 本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。 本标准主要起草人:赵立红、陈德威、张秀美、张冰、李军。 中华人民共和 国国家标准 GB/T 17999.6一 1999 SPF鸡 胚敏感试验 SPFchicken-Embryosusceptibilitytest 1 范围 本标准规定了胚敏感试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。 本标准适用于SPF鸡感染禽脑脊髓炎病毒后的抗体监测。 2 原理 VanRoekel毒株是禽脑脊髓炎病毒的一株胚适应毒株，具有高度嗜神经性。对非免疫鸡群的鸡胚 有致病性，引起肌肉营养不良、运动性降低、足趾卷曲等特征性病变。免疫鸡群的鸡胚对经卵黄囊接种的 病毒有抵抗力。 3 试剂和器材 3.1 试剂 3.1.1AE-VanRoekel病毒(0.2ml含100EIDso) 3.1.2 SPF蛋 3.1.3 被检蛋。 3.2 器材 3.2.1 1ml注射器 3.2.2 7“针头 3.2.3 恒温培养箱 3-2-4 超净工作台。 3.2.5 小型孵化器 操作程序 取被检蛋及SPF蛋孵至6日龄。 取6日龄被检鸡胚，每胚经卵黄囊接种。.2m工_含100EIDso的AE-VanRoekel病毒液，接种完毕 :.; 用蜡封孔，同时取6日龄SPF鸡胚接种与不接种病毒作为对照 4.3接种后的鸡胚，置37C-37.5C孵化器中孵化，每天照蛋一次，取出死亡鸡胚，接种后第12d取出 全部鸡胚待检 4.4 观察病变:非免疫鸡的鸡胚感染VanRoekel后出现特征性病变，早期为胸腹部肌肉、皮下水肿，当 接种后iod--12d解剖活胚时，见腿肌萎缩、足趾卷曲，注意与接种、不接种SPF对照鸡胚对比观察。 5 结果判定 5.1 当接种SPF对照鸡胚均呈禽脑脊髓炎病毒所致的特异病变，不接种SPF对照鸡胚无特异病变时， 国家质量技术监督局1999一11一10批准 2000一04一01实施 cs/T17999.6一1999 试验结果可靠。 5.2 判定 阴性:100%鸡胚有特征性病变，表明此鸡群无禽脑脊髓炎病毒抗体，属非感染鸡群。 阳性 50%以下的鸡胚有特征性病变，表明此鸡群有禽脑脊髓炎病毒抗体，属感染鸡群。