研究生 基因工程实验指导.doc

广东省高教厅重点实验室－现代生物技术实验室实验教材 基因工程技术实验指导 (研究生教材) 华南农业大学 现代生物技术实验室基因工程实验分室 二零零五年二月 编 者 的 话 本实验指导是为广东省高教厅重点实验室之一的“现代生物技术实验室”开设的“基因工程原理和方法”而编写的。本课程主要面向广州石牌地区六所高校的研究生，也包括部分高年级本科生。该课程以实验为主，为保证学生在修读本课程时有较好的理论基础，要求所有修课学生预修“分子生物学”或“分子遗传学”。 本课程实验采用了一个内容连贯的实验系统(用质粒载体克隆植物DNA片段)，作为同学们掌握DNA体外重组基本技术的训练(实验一至实验七)。另外，根据本研究室多年教学、研究工作的经验，我们还把反映近年基因工程技术发展的PCR、Southern杂交技术等纳入实验内容，以保证学生修完本课程后能较快地开展相应研究工作，更好地适应未来研究工作的需要。 本实验指导由庄楚雄、穆虹、易继财、姚涓、吴豪、张群宇、刘耀光、梅曼彤等老师参加编写，易继财老师负责指导书的编辑等工作。 本实验指导为试用第三版，试用后我们将根据各校修课的情况和要求作进一步修改，敬请兄弟院校的同行多提宝贵意见。 编 者 2005年2月 目 录 基因工程实验室学生守则( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (3 实验一 碱裂解法抽提质粒DNA ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( ( ( ( ( ( (4 实验二 琼脂糖凝胶电泳 ( ( ( ( ( ( ( (( (( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ((((((( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( (( 7 实验三 DNA的酶切 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((((( ( ( ( ( (( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( (9 实验四 目的片段的回收 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((((( (( ( ((( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ((( ( ( 11 实验五 DNA的体外连接 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((( ( ( (( ( (( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( ( ( (12 实验六 重组DNA的转化 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ((((((( ( ( ( (( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( 15 实验七 重组转化子的快速鉴定 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((((( ( ( ( ( ( (( ( ( 18 实验八 多聚酶链式反应( PCR ) ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((((((((( ( ( ( ( 19 实验九 植物DNA的抽提 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( ( ( ( ( ( ((((((((( ( (21 实验十 基因组DNA的Southern杂交分析 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((((((((24 附录I. 各种试剂的母液配方 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (((((((((( ( 28 附录II. 常用实验器具的清洗方法 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( ( ( ( ((((((((( ( 31 主要参考书 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( ( (( ( ( (( (((((((((( ( (32