制备蛋白质微阵列的玻璃表面修饰方法比较-检验医学.PDF

焦墅匿堂!堂生箜!!鲞筮兰塑些!型!翌丛盟丛些!堂：!堂!!：：№!： 文章编号：1001-2087(2006)04-0418-03中图分类号：0503 文献标识码：A 制备蛋白质微阵列的玻璃表面修饰方法比较 徐华1， 韩金祥1， 高雪芹1， 李钿2， 黄海燕1， 潘继红1 (1．山东省医药生物技术研究中心，卫生部生物技术药物重点实验室，山东省现代医用药物与 技术重点实验室，山东济南250062；2．山东省立医院风湿免疫病实验室，山东济南250021) 摘要：目的探讨用于制备蛋白质微阵列的5种不同修饰方法的玻片对蛋白质的固定能力，通过对荧光信 号强度的大小以及蛋白芯片检测的灵敏度的比较确定一种蛋白质固定效果好、信噪比高的玻片。方法将系列 稀释的人IgG分别点在5种不同修饰方法[包括氨基、多聚赖氨酸、3-氨丙基三乙氧基硅烷(APES)、醛基-磷酸盐 缓冲液、醛基一H：O]修饰的玻片上制备蛋白质微阵列，比较不同玻片修饰方法荧光信号强度的大小以及蛋白芯 片检测的灵敏度。结果5种玻片中APES修饰的玻片蛋白质固定效果最好，信噪比最高。结论APES修饰的 玻片比较适合制备蛋白质微阵列。 关键词：蛋白质微阵列；氨基修饰；醛基修饰；多聚赖氨酸修饰；3一氨丙基三乙氧基硅烷修饰 生物芯片／微阵列技术是上个世纪90年代产 材料和方法 生的高通量平行检测技术，它一经产生就显示了 极大的优势，在过去的10年里，基因芯片技术在 一、试剂和仪器 基因表达和人类疾病的研究方面显示出了极大的 磨砂边玻片、盖玻片(美国Sigma公司)，氨基 作用，并得到了广泛的应用，蛋白质和抗体微阵列 玻片(美国Cel 已经作为一种有力的研究工具¨。。除了能快速 识别与药物结合的蛋白质外，在识别蛋白质与蛋 丙基三乙氧基硅烷(APES，北京中杉金桥生物技 白质相互作用方面也有很大的进展，而且它在肿 瘤标记物的鉴定、细菌和病毒的检测、过敏原和自 身抗体的检测方面已经有了一定的研究进展¨。。 ray4000激光共聚焦扫描仪。 除了能够平行检测这一优势外，蛋白质微阵 二、5种不同修饰方法玻片的制备 列与传统的检i贝4方法如酶联免疫吸附试验、质谱 将玻片分别用强碱和浓硫酸浸洗，双蒸水冲 法、高性能液相色谱法相比，灵敏度较高…。目 洗，离心机甩干。 前制作蛋白芯片的固相支持物有多种，如玻璃片 (简称玻片)、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼 将洗净的玻片放人以1：50丙酮稀释的APES中， 龙膜等，但需要特殊处理。玻片具有价廉、表面光 停留20～30S，取出稍停片刻，再放人纯丙酮溶液 滑不渗透、背景低等优点，所以目前大多数蛋白芯 中除去未结合的APES。 片都采用玻片作为支持物‘31。点样用的玻片表 2．多聚赖氨酸玻片将玻片用清洁液清洗干 面的活化主要采用氨基硅烷、多聚赖氨酸、戊二醛 净后，浸泡于含10％多聚赖氨酸的磷酸盐缓冲液 等处理，使在玻片表面形成活化的氨基、羧基或醛 (PBS)中，置摇床60r／min平摇1h，双蒸水清洗， 基，与蛋白质的氨基或羧基进行缩合反应，形成共 离心机甩干。 价键。本研究旨在探讨5种不同修饰方法的玻片 3．醛基一PBS修饰玻片的制备按参考文献 对蛋白质的固定能力和反应活性影响的差异，筛 [4]进行。 选出一种比较适合制备蛋白质微阵列的玻片。 4．醛基一H，0修饰玻片的制备按参考文献 基金项目：山东省科技厅重点项目(003100104) 作者简介：徐华，女，1979年生，硕士，主要从事蛋白质芯片研究。 通讯作者：韩金祥，联系电话：0531 万方数据 万方数据