叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导.doc

　　叠鞘石斛茎段组织培养与花芽诱导 【摘要】 　　目的研究叠鞘石斛的快速繁殖及离体开花的培养体系。方法选用野生的叠鞘石斛带侧芽的茎段作为外植体，培养在附加不同激素的培养基上。结果MS培养基附加6-BA（1.0 mg·L-1），NAA（0.5 mg·L-1）对侧芽的诱导效果最佳。而MS培养基附加6-BA（2.0 mg·L-1），NAA（0.4 mg·L-1）最适合丛生芽的增殖。把无菌苗培养在附加6-BA（2.0 mg·L-1）的MS培养基中，少数植株被诱导开花，诱导率为10.0%。结论用带腋芽的茎段作为外植体在MS培养基中，附加一定的6-BA和NAA可以诱导丛生芽的产生。 【关键词】 叠鞘石斛； 组织培养； 花芽诱导 　　Abstract：ObjectiveTo study rapid propagation and in vitro flo for Dendrobium denndanum.MethodsStem edia one.ResultsThe best medium for lateral buds induction g·L-1),NAA (0.5mg/L), g·L-1),NAA (0.4 mg·L-1) edium g·L-1), the frequency of floral bud induction the segments edium denndanum; Tissue culture; Induction of floral buds 　　石斛是常用名贵中药材，属兰科（Orchidaceae）石斛属Ddendrobium。现已发现，该属有很多种类具有药用价值，其中铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛等药用价值很高，价格昂贵。石斛中含有多种生物碱、抗癌菲、类黄酮等物质，具有抗衰老、增强机体免疫力等作用［1］，其应用范围较广，需求量不断增加。但近年来由于受过度采伐、生长缓慢、繁殖率低等因素的影响，使石斛的野生资源严重枯竭，我国已将其列为濒危药用植物［2］，为挽救石斛属的植物物种，扩大药源，前人已对多种石斛属的植物进行了组织培养快速繁殖的研究［3～6］，但对叠鞘石斛的组织培养目前尚未见报道。本文报道了叠鞘石斛茎段在不同激素配比培养基中出芽、发育成苗的过程，同时初步进行了离体开花的诱导。 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料供试材料叠鞘石斛Dendrobium denndanum采于贵州省紫云县，并经贵州大学生命 科学 学院植物学教研室鉴定为叠鞘石斛。标本种植于贵州大学植物标本地。 　　1.2 材料处理与接种选取生长健壮、无病虫害感染的茎段，将其截成长1～1.5 cm的带芽茎段，用流水冲洗1 h，在超净工作台用75%的酒精消毒30 s，再用0.1%的HgCl溶液消毒12 min，无菌水冲洗5次。将此茎段接种于芽启动培养基上。每个配方接种10瓶，每瓶接种5段，22～24℃，光照12 h/d，光强度2 000 lx条件下培养。 　　1.3 培养基 　　1.3.1 芽启动培养基①MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+6-BA 1.0mg·L-1+ NAA 1.0 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；④1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂。 　　1.3.2 芽增殖培养基①MS+NAA 0.4 mg·L-1+ 不同浓度6－BA（单位同前） +2%蔗糖+0.8%琼脂；②MS+NAA 0.4 mg·L-1+ 不同浓度KT（单位同前） +2%蔗糖+0.8%琼脂； ③MS+NAA 0.4 mg·L-1+ 不同浓度ZT（单位同前）+2%蔗糖+0.8%琼脂。 　　1.3.3 生根培养基 ①MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.4 mg·L-1 +2%蔗糖+0.8%琼脂；② MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.4 mg·L-1 +2%蔗糖+0.8%琼脂；③ MS+6-IBA1.5 mg·L-1+NAA 0.4 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂。 　　1.3.4 成花诱导培养基① MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1 +2%蔗糖+0.8%琼脂；② MS+ ABA 0.5 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；③ MS+2－4D 0.1 mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；④ MS+6-BA 2.0 mg·L-1+2%蔗糖+0.8%琼脂；上述培养基pH均为5.8。 　 　2 结果 　　2.1 启动培养外植体