辛伐他汀对过氧化氢促兔血管平滑肌细胞增殖的影响.pdf

陈 花等 辛伐他汀对过氧化氢促兔血管平滑肌细胞增殖的影响 第8期 · 757· 辛伐他汀对过氧化氢促兔血管平滑肌细胞增殖的影响 陈 花 王建昌 张 婧 (第四军医大学西京医院老年病科，陕西 西安 710033) [摘 要] 目的 探讨辛伐他汀(SIN)对过氧化氢(H202)诱导的兔血管平滑肌细胞(VSI~IC)增殖的影响。方法 lO、50 mol／L SIM，与H202 共同作用后24、48、72 h采用CCK-8法检测VSI~IC增殖情况；TBA法检测培养基中丙二醛(I~IDA)含量，实验终点免疫组化法检测核因子．KB(NF．KB) 表达。结果 H202组与对照组相比，A450上升、I~IDA含量、NF·KB表达增加(PO．O1)；SIN预处理30 rain，与H202共同作用48 h后，50 mol／L SIM 显著抑制VSI~IC增殖，且培养液中I~IDA水平降低(PO．O1)；作用72 h后，lO、50 i~mol／L SIN均可抑制VSI~IC增殖及NF．KB的表达，培养液中I~IDA 含量低于48h的检测结果，50 i~mol／L组作用大于10 iJanol／L组(PO．05)。结论 一定浓度的SIN可抑制H202促使的VSI~IC增殖及NF．KB的表 达，减少培养基中I~IDA含量，且与时间和剂量有关。 [关键词] 辛伐他汀；血管平滑肌细胞；氧化应激；细胞增殖 [中图分类号] 11573 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9202(2008)08-0757-03 血管平滑肌细胞(VSlVIC)的增殖和迁移是动脉粥样硬化 SIN预处理30 rain。每组设6个复孔，实验重复3次。 (As)形成的重要机制之一，许多细胞因子参与了VSlVIC增殖 1．3 CCK-8法检测细胞增殖 上述各组细胞分别于培养48、 和迁移的过程。研究发现，活性氧(ROS)在血管病变形成中发 72 h后，在各孔中加入l0 CCK．8溶液，继续培养1 h后，在 挥重要作用，可以诱导VSlVIC原癌基因表达，促进细胞增殖。 450 rim波长处用酶联免疫检测仪测定各孔的光吸收值(A )。 他汀类药物是临床上十分有效的降血脂药物，近年来一些基础 1．4 划痕法检测VSlVIC的迁移 细胞接种于6孔板，80％融 和临床研究显示，他汀类药物不仅具有调脂作用，还有抗炎、抗 合后以无血清的DlVIEN培养基培养24 h，显微镜下以无菌移液 血栓、抗氧化等效应。本实验以过氧化氢(H：0：)为刺激因素， 器滴头在培养板底部成“一”字形划痕，显微镜下记录划痕区相 探讨其对VSlVIC增殖的影响及辛伐他汀(SIN)的抗氧化作用。 对距离，后用无血清培养液洗涤，更换含 10％胎牛血清的 DlVIEN培养液于实验终点显微镜下观察细胞迁移情况。 1 材料与方法 1．5 lVIDA水平检测 各实验组细胞分别于培养48、72 h后收 1．1 试剂和材料 CCC．SlVIC．1细胞株购自协和基础医学细胞 集上清液，按试剂盒说明书加样后在532 rim处用紫外分光光 中心，DlVIEN培养基购自北京正旦国际科技有限责任公司，特 度计测各管吸光度值(A)，以公式计算上清液中lVIDA含量。 种胎牛血清购自北京元亨圣马生物技术研究所，H：0：为Sigma 1．6 免疫组化染色法检测NF—KB表达 细胞接种于6孔板， 公司产品，SIN原料药由广州南新制药有限公司馈赠，丙二醛 培养至实验终点后4％多聚甲醛固定，行免疫组化染色，PBS代 (mDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所，CCK-8试剂盒购 替一抗作为阴性对照。判断标准：阳性细胞呈棕黄色，培养板 自碧云天生物技术研究所，核因子一KB(NF—KB)p65多克隆抗体 每孔于显微镜下随机计数5个高倍视野，以阳性细胞数占细胞 购自美国Santa ertlz公司，鼠两步法检测试剂盒、DAB显色试剂 总数的百分比作为判断标准。 盒均购自北京中杉金桥生物公司。