幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建与其重组蛋白免疫性的鉴定.pdf

维普资讯 、 ＼ 第 32卷 第 1期 浙 江 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vol32 No 1 2003丘 JOURNAL OFZHEJIANGUNIVERSITY (M EDICAISCIENCES) 2003 幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统 的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定 陈 嚣 ，严 杰 ，毛亚飞，钊守凤 (浙江 大学医学院病原生物学教研 室，浙江 杭 州 3i0031) [摘 要] 目的：克隆幽门螺杆菌(Hp)ureB基 因并构建其原核表达系统 。方法 ：采用高保真PCR从幽 门螺杆菌临 床分 离菌株 Y06中扩增 ureB基 因，T—A 克 隆后测 定核 苷酸序列 ，构建 pET32a的 ureB表达 载体 ，在 E．coli BI21DE3宿主茵 中用不 同浓度 的IPTG诱导表达 ，采用Hp全茵抗体的Westernblot和兔抗融合蛋 白血清 的免疫 扩散试验鉴定其免疫性 。结杲：所克隆的ureB基 因与报道 的相应核苷酸序列 同源性为 96．88 ～97．82 ，氨基酸 序 列 同源性高达 99．65 ～99．82 。pET32a—ureB—BI21DE3系统的UreB融合蛋 白表达量高达细茵总蛋 白的 4O 左右 。UreB融合蛋 白能与 Hp全茵抗体发生结合反应 ．免疫家兔能获得高效价抗体 。结论 ：本研 究成功地构建 了HpureB高效表达 系统，所表达 的UreB融合蛋 白有 良好 的免疫原性和免疫反应性 ，可作为 Hp疫苗 的抗原 。 [关键词] 幽 门，螺杆菌；ureB基 因；碱基序列；克隆，分子 UreB融合蛋 白／免疫性 [中图分类号] R377；R392．2 [文献标识码] A [文章编号] 1008—9292(2003)01—0004—05 Constructionofprokaryoticexpression system ofureB genefrom aclinicalisolateofH elicobacter pyloriand identificationofimmunogenicityofthefusionprotein CHEN Zhe，YAN Jie，MAO Ya—fei，etal(DepartmentofMedicalMicrobiologyandParasitology，Collegeof MedicalSciences，ZhOiangUniversity，Hangzhou310031，China) ~Abstract] Objective：TocloneHelicobacterpyloriureBgene．toconstructprokaryoticexpressionsystemofthe geneandto identify immunogenicityofthefusionprotein．M ethods：TheureBgenefrom aclinicalisolateY06of H ．pyloriwasamplifiedbyhighfidelityPCR．ThenucleotidesequenceofthetargetDNA amplificationfragm ent wassequencedafterT—A cloning．Theexpression vectorpET32awith insertedureB genewasconstructed．ureB fusionproteinwasexpressedinE．colistrainBI21DE3inducedbyIPTG atdifferentdosages．W esternblotusing antibodyagainstwholecellofH ．pyloriasw