发现细菌拮抗性的方法.pdf

两株高抑菌性抗生菌的抑菌性比较研究

学生姓名：罗冰科指导老师：彭玲

武汉生物工程学院生物技术系

摘要：以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为敏感菌，以地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌为拮抗菌。

测定并比较了两株目的出发菌株的抑菌效价。经过诱变和筛选，获得了比原出发菌株抑菌性

明显增强的菌株。

关键词：拮抗菌；抑菌效价

0．抗生菌

抗生菌，亦称拮抗菌，指能通过产生某种或某类特殊代谢产物，具有选择性地抑制或杀死

其他微生物的一些微生物。现在也将其广义称为益生菌的一种类型。两种微生物之间的这种

关系为特异拮抗关系，前者称为拮抗菌，后者称为敏感菌，拮抗性物质称抗生素或抗菌素。

Bacillus

芽孢杆菌（）是目前抗生菌中研究较多的一类，尤其是用于饲料工业和植物病虫

害防治（生防菌），主要的种类有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，同时这两种菌现在也称为

[1]

益生菌。

益生菌的有益功能是多方面的，大致归纳如下：屏障障功能、杀菌功能、营养功能、清

理功能、免疫功能和防癌功能。

以芽孢杆菌为代表的益生菌，可促进人体对营养物质的吸收，提高免疫力，预防和治疗

[2]

便秘及腹泻，降血脂，抑制肠道病源和腐败微生物的生长，分解致癌物质。因此，保持和

促进芽孢杆菌优势和生长，是提高人们健康长寿的重要手段。正是基于以上考虑，本试验就

是从普通菌种中经过诱变和筛选出具有抑制性的益生菌，以便以后发展更多的应用于生产生

活中。

1．材料与试剂

1.1实验材料

1.1.1菌种：拮抗菌，地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis)(武汉生物工程学院实验

室提供)和枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）(华中农业大学实验室提供)；敏感菌，金黄

色葡萄球菌和大肠杆菌。

1.1.2培养基：牛肉膏蛋白胨培养基

2．实验方法

2.具拮抗性目的菌株的筛选

1

（1）平板滤纸片抑菌圈法：取敏感菌菌液200uL涂布于牛肉膏蛋白胨平板表面，静置渗

透片刻，将直径为6mm的无菌小滤纸片贴在培养基相应位置，用5-50uL无菌移液枪吸取

10uL拮抗菌液滴加在滤纸片上，37℃恒温培养24h，测量抑菌环大小。

（2）琼脂块抑菌环法：用内径6mm的无菌打孔器（可用1mL无菌移液枪头代替）将拮抗

菌单菌落连同琼脂块取下，移于涂布有敏感菌的平板上，继续37℃恒温培养24h,测量琼脂

块周围抑菌环大小。

2.2紫外线诱变

将菌悬液4mL于9cm内有磁力搅拌器的无菌培养皿中，在暗室将平皿置于磁力搅拌器上，

于波长253nm，功率15W的紫外灯下，距离30cm，照射60s后开振荡照射，于不同时间

（1min,2min,3min）分别取样于无菌试管中，并将试管放于冰水中1-2h（防光修复酶的活

性）。然后将稀释后菌悬液涂布于培养基表面，于37℃恒温培养箱进行暗培养48h。待培养

基表面长出单个菌落，根据菌落生长情况，选择长势较好的菌落，采用琼脂块筛选法进行筛

选有抑制性的单个纯种菌落。

2.3抑菌性强弱的测定

2.3.1滤纸片抑菌圈法

取敏感菌菌液200uL涂布于牛肉膏蛋白胨，静置渗透片刻，将直径为6mm的无菌小滤

纸片贴在培养基相应位置，用5-50uL无菌移液枪吸取10uL拮抗菌液滴加在滤纸片上，37℃

恒温培养24h，测量抑菌环大小（mm）。

2.3.2牛津杯法

取敏感菌菌液200uL涂布于牛肉膏蛋白胨，静置渗透片刻，将牛津杯放在培养基相应

位置，用无菌移液枪吸取200uL拮抗菌液滴加在牛津杯里，37℃恒温培养24h，取出牛津杯

测量抑菌环大小（mm）。

3．结果分析

3.1出发菌株的抑菌性

以原出发菌株地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌为拮抗菌，以金黄色葡萄球菌为敏感菌，测

其抑菌性强弱。采用滤纸片抑菌圈法，实验结果如下：

表1两种拮抗菌对金黄色葡萄球菌的抑菌性（滤纸片法）（D:mm）

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