NY_T 1819—2009 饲料中胆碱的测定 离子色谱法.doc

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1819—2009 饲料中胆碱的测定 离子色谱法 Determination of choline in feeds Ion chromatography 2009-12-22 发布 2010-02-01实施 前 言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心(北京)、北京英惠尔生物技术有限公司。 本标准主要起草人：索德成、冯忠华、赵根龙、余东游、刘士杰、任泽林。 饲料中胆碱的测定 离子色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中胆碱的离子色谱检测方法。 本标准适用于配合饲料、添加剂预混合饲料、谷物籽实、饼粕和鱼粉中胆碱的测定。 本标准定量限：添加剂预混合饲料为40 mg／kg，配合饲料、谷物籽实、饼粕和鱼粉为80 mg／kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB／T 14699．1 饲料 采样 GB／T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 用盐酸溶液水解或直接用水提取样品中的胆碱，用水稀释至合适的浓度后，使用阳离子交换柱和电 导检测器分离测定。 4 试剂 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB／T 6682中一级水。 4．1 甲磺酸：色谱纯。 4．2 盐酸。 4．3 盐酸溶液 [C(HCl)＝0.1 mol／L]：取9 mL盐酸于1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 4．4 甲醇。 4．5 氯化胆碱标准品：纯度应大于95％。 4．6 氯化胆碱标准储备液：准确称取0.1 g(精确至0.000 1 g)于105℃干燥恒重的氯化胆碱标准品于 100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容。该标准溶液的浓度为1 mg／mL。2℃～8℃冷藏保存,有效期两 个月。 4．7 氯化胆碱标准工作液：精密量取适量氯化胆碱标准储备液(4．5)置于一棕色容量瓶中,用水稀释成 浓度为2 μg／mL、5 μg／mL、10 μg／mL、20 μg／mL、50 μg／mL、100 μg／mL的氯化胆碱对照品工作液。 2℃～8℃冷藏保存，有效期一个月。 4．8 流动相(4.5 mmol／L甲磺酸水溶液)：称取2.88 g甲磺酸(精确至0.01 g)，用水定容至1 000 mL， 该溶液浓度为30 mmol／L。取150 mL该溶液，用水定容至1 000 mL。 5 仪器和设备 5．1 离子色谱(IC)仪，带有电导检测器。 5．2 天平：感量0.000 1 g。 5．3 离心机：转速大于5 000 r／min。 5．4 超声波提取器。 5．5 滤膜：0.45 μm，水系。 6 采样和试样的制备 6．1 按GB／T 14699．1采样。 6．2 选取有代表性饲料样品至少500 g，按GB／T 20195制备样品。 7 实验方法 7．1 提取 7．1．1 饲料、谷物籽实、饼粕和鱼粉中胆碱的提取 称取试样2 g(精确至0.01 g)，置于100 mL容量瓶中，加入10 mL 0.1 mol／L盐酸溶液，混合后超 声提取10 min，于80℃提取2 h，定容。5 000 r／min离心或过滤。移取上层清液,用水稀释使其浓度在 2 μg／mL ～100 μg／mL之间，过0.45μm滤膜，上机测定。 7．1．2 预混合饲料中胆碱的提取 称取试样2 g(精确至0.01 g)，置于100 mL容量瓶中，加入80 mL水，混合后置于振荡器上剧烈振 荡或超声提取30 min，静置10 min，定容，离心或过滤,用水稀释使其浓度在2 μg／mL～100 μ／mL之 间，过0.45μm滤膜，上机测定。 7．2 测定 7．2．1 色谱条件 色谱柱：阳离子交换分离柱(长250 mm，内径4 mm)或性能相当的其他分析柱。 流速：1.0 mL／min。 柱温：40℃ 进样量：25 μL。 检测器：电导检测器。 7．2．2 测定 待IC分析仪基线平稳后，连续注入氯化胆碱标准溶液，直至得到峰面积能够重现的色谱峰。