体外受精和早期胚胎培养最终详解.ppt

试管婴儿 1978年7月26日，世界首例试管婴儿“路易斯．布朗”在英国诞生，现已成为母亲。 转基因试管牛 我国首例转基因试管牛“滔滔”于1999年2月19日在上海诞生 1988年3月10日我国首例试管婴儿 试管动物技术 是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育成早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。 快速繁殖动物优良品种 目的： 技术手段： 体外受精和早期胚胎培养 一、体外受精 1.卵母细胞的采集和培养 2.精子的采集和获能 3.受精 二、早期胚胎培养 1.采集的方法有哪些? 2.采集到的细胞能直接受精吗？ 1.采集的方法有哪些? 2.采集到的精子能直接和卵子受精吗？ 在体外受精要准备什么条件？ 在体外如何培养胚胎？ 1.卵母细胞的采集和培养 　　用促性腺激素注射处理后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。 如：小鼠、兔、猪、羊等 方法一： 超数排卵法 1.卵母细胞的采集和培养 方法二： 从屠宰的母畜卵巢中直接采集卵母细胞。 适用于大家畜和大动物，如牛 牛卵巢中采卵 牛卵巢 方法三： 借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具，从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。 适用于大家畜和大动物，如牛 B超活采仪 方法二和三采集的卵母细胞需经体外人工培养成熟 2.精子的收集和获能 1) 收集的方法: 假阴道法、手握法和电刺激等 2) 获能处理: 培养法：把精子放入获能液中。 （适用对象：啮齿动物、家兔和猪） 化学法：把精子放入一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，化学药物诱导。 （适用对象：牛、羊） 3.受精 在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程 离心的目的是什么？ 卵母细胞的培养的 目的是什么？ 保存剩余的卵子和精子的方法是什么？ 活体采集的牛卵母细胞 卵母细胞的成熟培养：CO2培养箱 卵母细胞的成熟培养：CO2培养箱 三、胚胎的早期培养 1.受精卵的发育培养： 检查受精状况和受精卵的发育能力。 2.培养液的成分： 无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等 3.适时移植： 向受体移植或冷冻保存。 动物胚胎培养液 动物细胞培养液 盐类 营养物质 调节物质 特有成分 无机盐、有机盐 氨基酸、核苷酸 维生素、激素 糖、氨基酸 血清、血浆 促生长因子 血清 无机盐、微量元素 不同动物胚胎移植时间不同 牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段 小鼠、家兔：卵裂期或囊胚阶段 试管婴儿：8个或16个细胞阶段 胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。 成熟卵子 人工体外受精 雌、雄原核融合 体内移植 试管牛 采集良种母牛的卵母细胞 卵母细胞的体外培养 采集良种公牛精子 精子体外获能 体外受精 良种牛体外受精胚胎 胚胎移植 受体牛 良种犊牛 成熟期牛 屠宰加工厂 市场 采集卵巢中的卵母细胞 “试管牛”工厂化生产的技术流程图 有性生殖 无性生殖 核移植技术、 胚胎移植 遵循 体外受精 胚胎移植 试管动物 克隆动物 生殖方式 技术手段 遗传物质 遗传规律 不遵循 比较试管动物和克隆动物 来自2个个体 主要来自核供体 * * * * * *