高山红景天RAPD反应体系的优化研究.pdf

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2008，36(3o)：13057—13058。13063 责任编辑 李玮 责任校对 傅真治 高山红景天RAPD反应体系的优化研究 1、媛媛 ，金东淳，刘宪虎 ，许明子 ，孙博2 (1．延边大学农学院农学系，吉林龙井 133400；2．延边大学农学院园艺系，吉林龙井 133400) 摘耍 [目的]筛选适合高山红景天的RAPD-PCR反应体系。[方法]以药用植物高山红景天雌株 的叶片为材料 ，采用改良的CrAB法提 取基 因组 DNA，并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化。[结果]结果表明，适合高山红景天的RAPD反应体系为 ：25 l总体积 中含 DNA模板20ng，M 1．5mn~l／L，引物 10pmol，dNTP100~／moVL，1 DNA聚合酶1．0u。[结论]CrAB法在高山红景天可获得质量较好 的基因组DNA。 关键词 高山红景天；tlAPD；反应体系 中图分类号 $567．239 文献标识码 A 文章编号 0517—66l1(2008)30—13057—02 Study伽 ltAlm forEndangeredPllan瑚 tlant 曲 BIJYlmmyl舶 etal (YanbianUniversity~rieultureCollege~rleulmraldepartment，IDning，Ji]in133400) AIl~mct O『bjective]nlestudyaimedtochooseRAPDLPcreactionsystemoffitRhodo／a／sachalinensis．[Method]Withtheleavesofgenomicp]ant Rbodo／／asacha／／nens／sasmaterials．tllegenomicD AwasextractedfromyoungleavesofendangeredmedicinalplantP,~do／／asacha／／nenss／bymeansof improvedCE method．111eRAI)DreactionsystemforRhodwa／sachaliner~iswasoptimizedincludingcyclingprogramandtheconcentrationoftemplate， primer，dMP， DNApolymeraseandM ．[Result]TheresultsindicatedthatⅡ1e咖 reactionsystemwere20ngofDNAtemplate，1．5mn~l／Lof 懈 ，primer10pmol， 100p．n~l／L， DNApolymerase1．0U．[Conclusion]1he willobtainhighqualitygenometeamDNAinRhodo／a／ sachdinemis． Keywords Rhodo／／asachalinensis；RfD；Reactionsystem 高山红景天(RhodiolasachalinensisA．Bor．)为景天科红景 DNA，再加入2 RNase37℃保温1h去除RNA。待溶解后加 天属(RhodiolaL．)多年生草本植物，民间多以其匍匐的根状 入0．3mol／LNaC1、等体积的无水 乙醇，冰上放置 20rnin沉 茎为药用，多用于强壮剂。高山红景天是雌雄异株的植物， 淀，13000r／rain离心 15min，小心去掉上清液，沉淀用70％酒 其性别类型较复杂，有雌株、雄株和两性株，两性株主要由雄 精润洗 2次，晾干 ，溶于5O TE中，一20℃保存 ，备用 。 花和两性花组成…1，各性别的形态在营养生长期差别不大 ， 1．2．2 基因组 DNA检测。将提取 的DNA样品吸取 150f』I， 只有在生殖生长时才可能根据花器形态进行准确的鉴别。 用 1XTE缓冲液稀释 20倍，以0．7％琼脂糖凝胶电泳检测 近几年 ，随着分子生物学实验技术的发展 ，利用分子标记技 DNA的完整性，根据所测DNA的浓度，用 1×TE缓冲液将其 术早期鉴别不 同性别=[2]，已成为雌雄异株植物研究较常用的 稀释至 10r ，于一20℃冰箱中保存、备用。 技术手段。该研究旨在通过对高山红景天RAPD扩增条件的 1．2．3 RAPD扩增反应。建立