基因工程的运输工具.pdf

切断的DNA片段要与受体细胞的

DNA连接，你觉得可以用什么酶？

2.基因的针线──DNA连接酶

阅读思考：

DNA聚合酶和DNA连接酶有何

相同和不同点？

.

作用：将双链DNA片段缝合起来恢复被限制酶切开

的两个核苷酸之间的磷酸二酯键

种类：E.coliDNA连接酶：来源与大肠杆菌

TDNA连接酶：来源与T4噬菌体

4

差异：E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不

能将双链DNA片段平末端之间进行连接;T4DNA连接酶既可“缝合〞双链DNA

片段互补的黏性末端,又可“缝合〞双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间

的效率比较低.

.

.

想一想:DNA连接酶与DNA聚合酶是

一回事吗?为什么?

DNA连接酶DNA聚合酶

连接DNA链双链单链

作用用于基因的表达载DNA扩增复制

体的构建

在两DNA片段之间将单个核苷酸加

形成磷酸二酯键到已存在的核酸

连接部位片段的3’末端的

羟基上，形成磷

酸二酯键

.

答：不是一回事。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键〔在

相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟

基之间形成〕，那么，二者的差异主要表现在什么地方呢？

〔1〕DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端

的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形

成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。

〔2〕DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二

酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上

的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。

此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。

.

稳固练习

限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不

同限制酶切割形成的DNA片段：

(1)…CTGCA

(2)…AC

(3)GC…

…G

…TG

CG…〔4〕…G

(5)

G…

(6)…GC

…CTTAA

ACGTC…

…CG

(7)GT…

(8)AATTC…

CA…

G…

总结规律

你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？

限制酶所识别的序列有什么特点？

无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中

轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。.

3基因进入受体细胞的载体“分子运输车〞

1；作用；