PTEN反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞4EBP1-eIF4E表达影响.doc

PTEN反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞4EBP1\eIF4E表达影响[摘要]目的：探讨PTEN反义寡核苷酸（ASODN）抑制PTEN后对EC9706细胞4EBP1、eIF4E表达的影响。方法：利用阳离子脂质体介导PTEN的ASODN、无义寡核苷酸（N-ODN）转染EC9706细胞，终浓度为3μmol?L、6μmol?L、12μmol?L的ASODN为实验组，终浓度12μmol?L的N-ODN为无关对照组，不进行转染的为细胞对照组。运用免疫细胞化学检测浓度为3μmol?L、6μmol?L、12μmol?L作用24h、48h、72h后EC9706细胞4EBP1、eIF4E的表达。结果：PTEN的ASODN转染EC9706细胞后随浓度和时间增加4EBP1表达降低而eIF4E表达增强，在同一时间不同浓度和同一浓度不同时间差异均有统计学意义（P 3讨论 恶性肿瘤的发生是一个多因素、多基因参与的、综合的、复杂的过程，其中包括了原癌基因的激活以及抑癌基因的失活等因素。而信号转导通路在恶性肿瘤的形成中所具有的重要作用已被大家所公认，其与恶性肿瘤细胞的生存、分化、侵袭、转移有着重要的的联系，其中PI3k/Akt/mTOR这一通路在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用 磷脂酰肌醇-3羟基激酶（PI3K）是一个酯酶，PI3k/Akt/mTOR信号通路的激活以PI3K的活化而启动。在一些细胞外因子的作用下，诸如缺氧、细胞因子、生长因子、激素等均可激活PI3K，进而磷酸化其底物3，4二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）使其转化为3，4，5三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3），而激活AKT，活化的PI3K/Akt可能通过TSC1/2复合物进一步激活其下游分子mTOR。激活的mTOR随后磷酸化它的两个下游分子，即翻译抑制分子eIF-4E结合蛋白I（4E-BPI）和核糖体蛋白P70S6K，并且使4EBP1与eIF4E形成的复合物中释放eIF4E，进而启动并促进蛋白质的翻译。在PI3K/Akt/mTOR信号转导通路中，PTEN蛋白可以逆转PI3K所催化的反应，是PIK3/AKT通路的一个负向调节因子，它可以使磷脂酰三磷酸肌醇（phos.phatidylinositol3，4，5-trisphosphate，PIP3）去磷酸化而转变为磷脂酰二磷酸肌醇（phosphatidylinosit0l4，5.diphosphate，PIP2），进而降低PIP3浓度而对PI3K／Akt信号转导起负调控作用。当它发生突变时PIK3/AKT通路活性增强，下游mTOR的活性也随之增强，从而抑制4E-BP1的合成、促进eIF-4E的合成。PTEN的反义寡核苷酸使PTEN基因沉默，功能缺失而使PI3K产物增加、Akt组成性活化，导致mTOR信号途径的上调，抑制4E-BP1的功能和促进了eIF-4E的作用，【4】 在本研究中转染PTEN的反义寡核苷酸于食管癌细胞后4EBP1蛋白的表达下降而eIF-4E表达增强，该结果与PTEN和PI3K/Akt/PTEN/mTOR信号转导通路的关系是一致的。当PTEN基因异常，PTEN蛋白表达下降则对mTOR的抑制降低，使mTOR的表达增强，而过度表达的mTOR抑制4E-BP1的合成、促进eIF-4E的合成，从而使4EBP1蛋白的表达下降而eIF-4E表达增强。说明在食管癌EC9706细胞中4E-BP1、eIF-4E为PI3K/Akt/PTEN/mTOR信号转导通路的重要下游因子；肿瘤细胞PTEN表达降低致蛋白合成抑制因子4E-BP1减少蛋白合成促进因子eIF-4E合成增加，从而使肿瘤细胞具有很强的增殖能力，生长旺盛，那么增强PTEN基因将抑制抑制细胞的生长、增殖，为临床肿瘤的治疗提供一定的思路，即增强抑癌基因或消除促进致癌基因表达的因素对抑制肿瘤的生长具有重要意义。 参考文献： [1]LiL，RossAH.WhyisPTENanimportanttumorsuppressor?[J].JCellBiochem，2007；102（6）：1368―1372. [2]王晓丽，黄娟，李林等.真核细胞翻译起始因子eIF4E的研究进展[J].华西医学，2009.24（3）：787-788. [3]何华.如何让正确的对免疫组化结果进行半定量评分，中外健康文摘.临床医师，2008，5（7）：162 [4]成志勇，杨晓阳，薛芳，等.PTEN对K562细胞mTOR调控的研究，肿瘤2009，29（2）：139-144. 1