04-蛋白质的制备-牛奶中提取酪蛋白.ppt

实验四蛋白质的制备---牛奶中提取酪蛋白一、实验目的二、实验原理三、实验器材四、材料与试剂五、操作方法六、注意事项一、实验目的1．通过实际操作加深对蛋白质理化性质的认识。2．利用蛋白质的等电点性质分离蛋白质的基本操作方法。3.利用透析法分离蛋白质的基本操作方法。二、实验原理1．蛋白质溶液的带电性质和等电点pH（pI）；+OH－+H++OH－+H+COOHPrH3N+COO－PrH3N+COO－PrH2NpH＜pIpH=pIpH＞pI等电点pH（pI）时，蛋白质溶液具有：（1）不稳定，容易从溶液中沉降出来；（2）由于净电荷为零，双电层结构受到破坏，从而容易聚集而沉淀。二、实验原理蛋白质溶液的胶体性质；蛋白质溶液是胶体溶液；不能通过半透膜。胶体性质的应用：（1）透析；（2）超滤；小分子溶出三、实验器材1.常规的玻璃器皿。2.离心管和离心机。离心机的组成：离心机使用注意事项：（1）离心管要对称平衡；（2）运行前速度调到零，先调时间，然后慢慢调速度。（3）离心结束时务必要把速度按钮复零。（4）时间为达规定转速后。四、材料与试剂1．原始实验材料：鲜牛奶（市售）2.其它试剂（1）0.5mol/LHCl溶液（2）0.5mol/LNaOH溶液五、操作步骤（方法1）1．取牛奶30ml，离心3000rpm×15min，除去脂肪层；向脱脂奶中加入等体积的蒸馏水，用0.5mol/LHCl溶液调pH至4.6，离心2000rpm×3min，弃上清液；沉淀中加入60ml水，边搅拌边用0.5mol/LNaOH调pH至7.0，使其沉淀全部彻底溶解。用0.5mol/LHCl溶液调pH至4.6，离心2000rpm×3min，弃上清液；五、操作步骤（方法1）5.重复操作3-4；6.沉淀中加入1mol/L的NaOH溶液，调pH至7.5，装入预处理过的透析袋中。7.4℃透析48小时，即可获得酪蛋白粗品；8.结束实验，完成实验报告，下次实验带来交给指导教师。六、注意事项1、离心时，样品要对称平衡。误差0.5g。2、使用离心机时，严格按照操作规程进行。3、调整pH值时，越接近所需值，越用少量的酸碱来调节。先快后慢，不要过头，防止变性。4、记录每一步加入酸和碱的用量。六、注意事项下次实验：Bradford法测定蛋白质含量（酪蛋白）时间：4月25日下午2：00今天值日：第7，8，9组