毛细管电泳技术在功能化中药指纹图谱中的研究.doc

PAGE PAGE 6 毛细管电泳技术在功能化中药指纹图谱中的研究 摘要：通过指纹图谱建立疗效与化学成分的关联，探索指纹图谱与药效的联系，阐明色谱图中指纹峰、特征峰与中药功效的关系，可从中药疗效的角度出发，全面地研究中药的各种活性成分，建立“谱”－“效”关系，毛细管电泳技术无疑是一种很有应用前景的方法，它可以从整体上表征中药组分的特征,同时可以从整体上表征中药组分与受体发生相互作用前后组分种类与数量的变化, 全面评价其质量的优劣，是一种科学的中药质量控制的新模式。 关键词：功能化；中药指纹图谱；毛细管电泳技术 1 毛细管电泳技术在功能化中药指纹图谱的意义 1.1 功能化中药指纹图谱 功能化中药指纹图谱[1](TCM-FP)指中药材经过适当的处理后，获得其中的物质基础，采用现代分析技术，对物质基础进行化学物质信息的表达，并与这些化学物质的药理学参数或药效学表达进行关联，通过能够表示该中药材特性的共有峰的图谱和相关数据进行“谱”－“效”关系的表征。 1.2 药效学表达或药理学参数 在现代生理学、药理学研究中，常常选用一些指标对药物的疗效以及机体对药物的反应进行定性定量的描述。药物分子与生物大分子的结合常数Kb可评价药物与受体的结合程度、强度，可用于活性成分的初步筛选。药物在体内各种pH值环境下存在状态的解离常数pKa在药理学上可以为在分子水平上研究药物的吸收、传送及与受体结合提供重要的信息。此外，药物在体内的油水分配系数logPow，可为化合物的跨膜转运能力提供有益的参考。亦可利用对复杂样品中未知化合物的某种官能团的识别，从一定程度上评价该复杂样品的某种活性。 1.3 毛细管电泳技术的优势 毛细管电泳技术[2]（Capillary Electrophoresis，CE）是离子或荷电粒子以电场为驱动力，在毛细管中按其淌度、分配系数不同进行高效、快速分离的一种电泳技术。CE的特点：1、多——分离模式多，使得其分离对象范围广，几乎涵盖了中药中存在的所有组分；2、快——分析速度快，分析时间一般为几十秒到几分钟；3、好——分离效能好，每米理论塔板数在105以上； 4、省——分析费用省，进样体积小，一般为纳升级。 一种中药材通常含有多种有效成分,其化学组分结构复杂,种类繁多，而且在药材中含量往往不高,采用普通的分离分析方法难以实现完全的分离和定量测定；要想整体地研究中药的各种活性化学成分，建立“谱”－“效”关系，CE则不失为一种对中药复杂多组分进行同时分离分析的有效手段，同时可以从整体上表征中药组分与受体发生相互作用前后组分种类与数量的变化,初步反映中药组分的药理作用机制。 毛细管电泳技术在功能化中药指纹图谱中的应用 2.1 CE在中药活性成分研究中的应用 据报道，目前主要研究的中药活性成分有以下六大类：生物碱类、黄酮及黄酮苷类、有机酚酸类、蒽醌类、香豆素类及皂苷类 [2]。 2.1．1 生物碱类（Alkaloids） 生物碱在自然界中分布很广，一般都具有强烈的生理活性，有些甚至有巨毒（如乌头中所含的乌头碱）。因此建立生物碱的分析方法就显得十分重要。在中草药的毛细管电泳分析中，它是被研究得最多的一类标志性化合物。由于生物碱在低pH下通常荷正电，所以生物碱常常能在pH低于7的缓冲溶液中得到分离分析。目前多采用CZE模式来分析中药中的生物碱。李琴韵等[3]采用CZE法对中国药典收载的3个不同品种的14个吴茱萸样品(不同产地)中所含吴茱萸碱进行含量测定,同时还在两种波长下,建立了吴茱萸样品的高效毛细管电泳色谱指纹谱,能将3种不同品种的吴茱萸明显地区分,揭示了其内在质量,方法准确、简便。 2.1.2 黄酮（Flavonoids）及黄酮苷类（Flavonoid Glycosides） 黄酮类化合物大多是中性分子，多采用MECC及CZE两种模式分离，而其中以MECC为多。台湾的Lin Yingmei[4]等报道用MECC模式分析黄芩中黄酮成分，并将黄芩中6种主要黄酮类化合物进行了分离，线性关系较好。 2.1.3 有机酚酸类（Organo - Phenolic Acids） 有机酚酸类成分解离后带负电荷，以CZE模式分析时在中性成分后出峰，分析时间较长。可在缓冲液中加入阳离子表面活性剂CTAB(十六烷基二甲基季胺溴)等，将电渗流(EOF)改向，称逆电渗流(Reversed EOF)，使出峰顺序先后依次为负离子，中性分子、正离子，可缩短分离时间。范国荣等[5]进行了四倍体板蓝根中五种有机酸成分的毛细管电泳分离分析。此方法大改善了HPLC法的分析成本高，溶剂有毒等缺点，并且提高了灵敏度。 2.1.4 蒽醌类（Anthraquinones） 蒽醌类成分是许多中药的有效成分，尤以二元或三元羟基蒽醌及它们的衍生物广泛存在于植物性的泻药中，可