人教版高中生物选修一专题五课题一 DNA的粗提取与鉴定（17张PPT).ppt

DNA的鉴定 * 一、基础知识 1、提取DNA的方法 （1）DNA的溶解性 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 ②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 （2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解细胞膜， 但对DNA没有影响。 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 DNA+冰醋酸、少量浓硫酸+二苯胺 蓝色物 2、DNA的鉴定 100℃ 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 DNA+冰醋酸、少量浓硫酸+二苯胺 蓝色物 100℃ 二、实验设计 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 （三）去除滤液中的杂质 方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。 方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min，嫩肉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 方案三：将滤液放在60~75℃的恒温水浴中保温10~15℃，注意严格控制温度范围。 （四） DNA的析出与鉴定 1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。 2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 三、操作提示 1、以鸡血为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 2mol/L 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 ⑤过滤→取纱布上的滤物 纱布过滤 ⑥再次溶解DNA 2mol/LNaCl溶液 取滤物 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 ⑦加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 *