脑组织.doc

脑组织 动物处死2min内取脑组织，选取视交叉后Imm至乳头体之间的脑组织，首先冠状位向后取2mm的厚度，4%多聚甲醛溶液固定，按照常规脱水、透明、石蜡包埋，切片后进行HE染色 暴露出大鼠脑组织，用眼科剪轻轻剪断脑底各相连神经，取出完整组织，放入4%多聚甲醛中固定48一72小时。 腓肠肌 取腓肠肌，用4℃预冷的生理盐水清洗，去除血污，滤纸吸干水分，锡箔纸包裹做好标签，浸入液氮3Omin后放入一80℃超低温冰箱冷冻。 左后肢腓肠肌内侧头中下部1/3处快速取约0.5g组织，用冰生理盐水洗去浮血，剔除脂肪及结缔组织，液氮速冻后置于一80℃低温冰箱保存以备提取RNA。 在左后肢胖肠肌内侧头中下部1/3处快速取下约0.5x0.5xlm3肌组织，入4%中性多聚甲醛固定液中固定，以备光镜组织切片的制备。在每组12只动物中随机取3只动物左后肢腓肠肌内侧头中下1/3处约0.5x0.5x0.1cm，组织块，立即入3%戊二醛固定液中固定，以备透射电镜切片的制备。余下的肌肉经液氮冷冻后，置于一80℃低温冰箱保存待测。 取双下肢排肠肌，深层腓肠肌放入高压灭菌的冻存管中，于液氮中暂存，编号后置于一80℃冰箱中保存备用于mRNA及蛋白测定。取一小部分组织置于20%中性福尔马林中充分浸泡24小时后，常规石蜡包埋，切5um厚的切片，留测病理及免疫组化指标。取lm3的组织置于电镜液电留测电镜，其余大部分排肠肌组织置于4℃线粒体提取介质中，以备提取骨骼肌线粒体。 股四头肌 取出下肢股四头肌，生理盐水漂净血渍后滤纸蘸干，迅速放入-70℃液氮中保存 取大鼠左侧股四头肌股直肌深层肌肉约200mg，放入无菌EP管，液氮冻干，-70℃冰箱保存，待测骨骼肌分子生物学指标。 取右侧部分股四头肌股直肌，先经异戊烷处理，再用液氮冻干，-70℃冰箱保存，待做骨骼肌冰冻切片 完整剥离双侧腓肠肌，冰盐水冲洗，滤纸吸干，电子天平称重。取少许左侧腓肠肌组织约300mg，按照1：9（W/V）的比例加入4℃生理盐水，然后在冰浴中电动匀浆、超声粉碎(4次，10s／次，间隔10s)，4℃离心（12000 rpm）15min，取上清，-30℃保存待肌肉组织生化指标。 取出股四头肌，于冰生理盐水中洗净血液，装入样品管中，并迅速将之放入一84度超低温冰箱中。 开胸心脏放血，提取股四头肌组织，PBS溶液冲洗。切取适量股四头肌组织置4%多聚甲醛中固定备作石腊切片。剩余的股四头肌组织迅速放入-70℃冰箱保存。 大鼠股四头肌置15%中性福尔马林固定24h以上，脱水包埋:器官经改刀后置于15%甲醛中24h以上，70%乙醇30h，80%乙醇24h，95%乙醇5h，100%乙醇1h，苯15min，软蜡30min、硬蜡90min、石蜡包埋 取小鼠右腿的股四头肌后，用滤纸吸去残留血液，称重，记录股四头肌重量，用EP管封闭后直接投入液氮，再转移至一80℃超低温冰箱保存.以备用于RT一PCR测MHC四种亚型的基因表达。 迅速取部分股四头肌以10%多聚甲醛固定，待光镜观察、免疫组织化学分析；部分以4%戊二醛固定，待电镜观察。 血管 在无菌条件下取出主动脉弓至肾动脉一段，放入PBS液中。然后再移入超净台，放入培养皿，剥离血管，沿纵轴切开，摊平，充分暴露内膜，刮取内膜，将内膜组织移入EP管，加入0.smlRNA裂解液(6mol八)，放入冰箱4℃保存 在无菌条件下取出主动脉弓至肾动脉一段，放入10%福尔马林中固定，梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，浸腊、包埋，待切片。 打开胸腔分离并剪下主动脉，去除周围过多的结缔组织，切取胸主动脉上段10%PBS甲醛固定用于组织学检测；中段，取6mm宽血管条，观察其收缩舒张反应性;下段，液氮贮存，用于测定AGEs、MDA含量，SOD、NOS活性，eNOS、VCAM一1蛋白表达等。 取主动脉弓-70℃保存，同时部分主动脉弓置入4%多聚甲醛固定液中固定，待光镜、免疫组化检测 分离背部大血管，固定于10%甲醛，经石蜡包埋后切片备用，行HE染色 快速分离胸主动脉，冰生理盐水洗净后，一部分置入液氮中保存，用作AGEs、原位杂交、荧光定量PCR等检测；剩下部分主动脉置入福尔马林中固定用作免疫组化及病理检测。 找到并分离胸主动脉剪断，可见大鼠心脏仍呈窦性搏动，自主动脉根部游离整个心脏，迅速移入预冷的生理盐水漂洗血液，取出吸干后迅速在分析天平上称重，精确至0.00019。取胸主动脉长约3一4cm，心肌大小约Icm3迅速放入甲醛留作HE染色用，取胸主动脉长约Icm，lmm3大小左心室置入戊二醛溶液的小瓶中，送电镜检查。 心 切取大鼠心脏，去除结缔组织和心房部位，心室称重，用10%甲醛溶液固定用于组织学检测。 大鼠心尖部称重后立即加入固定液(4%多聚甲醛/0.IMPBS)中，已固定好的组织经梯度酒精脱水(70%一80%一90