复方血栓通对猴脉络膜一视网膜内皮细胞增生、移行和管腔形成的作用.pdf

中华眼视光学与视觉科学杂志 2011年 8月第 13卷第4期 ChinJOptom OphthalmolVisSci，August2011，Vo1．13，No．4 ．263 · 论著 · 复方血栓通对猴脉络膜一视网膜内皮细胞 增生、移行和管腔形成的作用 罗旭异 吴星伟 顾青 张红梅 施宇华 仇亚婷 【摘要】 目的 探讨复方血栓通干预猴脉络膜 视网膜内皮细胞(RF6／A)参与血管生成的作用及机 理。方法 实验研究。本研究分为四部分：①取对数生长期RF／6A细胞进行培养，设立空白对照组、阳性 对照组 以及不 同浓度 的复方血栓通观察组 ，每组均加入终浓度为 10ng／ml的血管 内皮生长 因子 (VEGF)．阳性对照组加入终浓度 0．20mgm／l的硫酸鱼精蛋 白，复方血栓通观察组设立 0．39～50．00mg／ml 的多个不同浓度组。培养 24h后采用酶联免疫检测仪测定各组吸光度 4值 ，观察不同浓度的复方血 栓通对VEGF诱导的RF6／A细胞增殖的影响。②设立空 白对照组和终浓度为 3．13、6．25、12．50mg／ml 的复方血栓通组．培养24h后检测不同浓度复方血栓通对RF／6A细胞移行的影响。⑨设立空白对照组 和终浓度为 0．39、0．78、1．56mg／ml的复方血栓通组，培养 12h后检测不同浓度的复方血栓通对 RF6／A 细胞管腔形成的影响：④设立空白对照组、终浓度为0．20mg／ml的硫酸鱼精蛋白阳性对照组和终浓度 为 1．56、3．13、6．25mgm／l的复方血栓通组 ，培养 24h后 ，运用 WesternBlot和实时定量逆转录聚合酶 链反应(RT．PCR)的方法，分别检测不同浓度的复方血栓通对 RF／6A细胞表达VEGF、基质金属蛋 白酶 2 (MMP．2)蛋白和mRNA的影响。对多组计量资料进行单因素方差分析。结果 ①各组间4值差异有统 计学意义 (F=158．669，PO．O1)，同空 白对照组比较，0．78～25．O0mgm／l浓度的复方血栓通对VEGF诱导 的RF／6A细胞增殖具有明显抑制作用 均0．01)；②复方血栓通浓度为0、3．13、6．25和 12．50mCml时， RF／6A细胞移行数分别为 123．3±13．8、l14．3+15．5、54．0+6．1和 4O．3±10．1，组间差异有统计学意义 (F-36．918，P0．01)；与空 白对照组 比较 ，6．25和 12．50mg／ml浓度 的复方血栓通对 RF／6A细胞移行具 有明显的抑制作用(P均0．01)；③复方血栓通浓度为0、0．39、0．78和 1．56mg／ml时RF／6A细胞内皮管 腔形成数分别为 20．3+2．5、12．7+2．1、9．7±1．2和 0．7+0．6，组间差异有统计学意义 (F=64．324，P O．01)；与空 白对照组 比较 ，0．39、0．78和 1．56mgCml浓度的复方血栓通对 RF6／A细胞内皮管腔形成均 具有明显的抑制作用 (P均0．O1)，且抑制作用随浓度增加而增强 ；④空 白对照组、阳性对照组以及 1．56、3．13和6．25m咖 l浓度 的复方血栓通组 VEGF和 MMP．2蛋白相对含量组间差异均有统计学意 义 (F=343．346、1670．505，P均0．01)；与空 白对照组比较，其余各组均具有显著抑制 RF／6A细胞VEGF 和 MMP．2蛋 白表达 的作用 (P均0。01)，复方血栓通 的抑制作用随浓度增加而增强 ；各组 VEGF和 MMP．2mRNA相对含量的差异也有统计学意义 (F=228．130，208．579，P均0．01)，与空 白对照组比较， 其余各组均具有显著抑制 RF／6A细胞VEGFmRNA表达的作用 (P均0．01)，复方血栓通的抑制作用 随浓度增加而增强。结论 复方血栓通可能通过抑制 RF／6A细胞增殖、移行 以及管腔形成来抑制其参 与新生血管生成 ．其机理可能与抑制 RF／6A细胞 VEGF、MMP．2的表达有关。 【关键词】 复方血栓通，中草药； 血管生成抑制剂； 脉络膜新生血管； 基质金属蛋白酶类； 血管内皮生长因子类 ： 细胞增生 ； 细胞移行 Effects of Complex Xueshuantong on the proliferation， migration， and tube formation of rhesusehoroid-retinaendothelialcells