GB/T 19564-2004落叶松种子鉴定实验方法　随机扩增　多态性DNA法.pdf

ICS65.020.20 B61 荡黔 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T19564--2004 落叶松种子鉴定实验方法 随机扩增多态性DNA法 Experimentalidentificationmethodforspeciesoflarchseed-RAPD 2004-06-22发布 2004-12-01实施 串督留瞥臀瓣瞥袅臀臀暴发布 GB/T 19564-2004 合． 前 r勺 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准起草单位：国家农业标准化监测与研究中心（黑龙江）、黑龙江省质量技术监督局。 本标准主要起草人：王庆贵、徐晶、姜雯、李光宇、石绍业、王卫国。 标准分享网 GB/T19564-2004 引 言 目前，我国林木种子的鉴定多采用感官鉴定、理化水平鉴定等方法。这些方法所需的检验周期较 长，不具备分子水平鉴定的诸多优点。 随着分子生物学的发展，特别是20世纪90年代以来，分子生物学的相关技术已被广泛应用，其检 测对象为DNA大分子— 生物的遗传基础。以DNA为检测对象，具有许多其他检测水平所不具备的 优点：首先，可供探测DNA标记的数量可能是无限的，这是同工酶技术所无法比拟的；其二，DNA分析 技术不像其他技术那样随组织或发育阶段而异，植物体任何部位、任何时期提供的DNA均可用于分 析，其检测结果都是一样的；第三，DNA分析不受环境影响，其变异只源于等位基因DNA序列的变异， 这种稳定性便于揭示品种间的遗传变异，从而排除了环境变异所造成的表型变异。 基于上述优点，DNA分析技术是农、林、牧、渔等品种鉴定的先进方法。 GB/T 19564-2004 落叶松种子鉴定实验方法 随机扩增多态性DNA法 1范圈 本标准规定了落叶松种子鉴定的具体实验方法。 本标准适用于利用随机扩增多态性DNA(RAPD）法对落叶松种子鉴定的实验过程。 2 术语、定义和缩略语 2.1术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1.1 聚合醉链式反应 polymerise chain reaction 一种可以从少量至一个拷贝的特定碱基顺序的DNA片断在体外花费几个小时即可扩增出数百万 个分子的酶催化反应，即DNA合成反应。 2.1.2 随机扩增多态性DNA random amplified polymorphic DNA 是以聚合酶链式反应为基础，用随机排列的寡聚脱氧核昔酸单链作为引物扩增基因组中不同位点 的DNA，进而揭示多个位点等位基因间多态性的一种分子标记方法。 2.1.3 核昔酸 nucleotide 是构成核酸的基本单元，由三部分组成：五碳糖、磷酸和环状的含氮碱基。 2.1．4 引物 primer 一条互补结合在模板DNA链上的短的单链，提供3-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模 板DNA的互补链。 2.1.5 多态性 polymorphism 一对引物在两个或两个以上不同材料基因组DNA之间扩增，得到数目不同或长度不同的DNA 片断。 2.2 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 RAPD 随机扩增多态性DNA(Random Amp