《中国药典》2015年版辅酶Q10异构体检查方法的探讨.doc

《中国药典》2015年版辅酶Q10异构体检查方法的探讨 谢升谷1，郑国钢，陈悦* 中图分类号： Xie Shenggu1, Zheng Guogang2, Chen Yue1* (1.Zhejiang Institute for Food and Drug Control, Hangzhou 310058; 2. Zhejiang Center for Drug and Cosmetic Evaluation, Hangzhou 310012) 辅酶Q10为脂溶性抗氧化剂，具有提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老等功能，医学上广泛用于心血管系统疾病，国内外广泛将其用于营养保健品及食品添加剂[1-2]。《中国药典》2015年版二部辅酶Q10原料药〔检查〕项下采用正相色谱法测定异构体含量，其方法未规定系统适用性试验，仅对相对主峰保留时间0.9处色谱峰认为是异构体峰[3]。由于该方法仅采用相对保留时间定位，且由于不同实验室、色谱柱型号、仪器品牌等影响因素，易导致该异构体的漏检或误检。本文建立，。 1 仪器与试 Agilent 1260高效液相色谱仪 辅酶Q10对照品（中国食品药品检定研究院，批号？）；辅酶Q10异构体系统适用性对照品（USP，批号F0B194）；辅酶Q10（浙江医药股份有限公司新昌制药厂提供，批号1301101，1302101，1303101）；正己烷、乙酸为色谱纯，其他试剂为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱柱Luna Silica色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相流2.0 ml·min-1；检测波长2 nm；柱温35；进样量20(l。。 2.2 称取辅酶Q10对照品约30mg，加正己烷溶解并稀释制成每1ml中含约1mg的溶液，量取10 ml，分别加入30%过氧化氢溶液2、5、10μl，置光照箱（2000 lx,温度30℃）分别放置4、24 h，作为系统适用性试验溶液，按上述色谱条件分别进样，记录色谱图，典型色谱图见图1。 结果显示：30%过氧化氢溶液的加入量与异构体生成量基本无关，但破坏时间与异构体生成量关系较大。由于测定系统为正相系统，水性溶液加入量应尽量少，且为试验的方便快速，故选择系统适用性试验溶液制备条件为加入30%过氧化氢溶液2 μl，放置4 h。同时称取辅酶Q10异构体系统适用性对照品约10mg，加正己烷溶解并稀释制成每1ml中含约1mg的溶液，作为系统适用性试验比对溶液。按“2.1”色谱条件进样，记录色谱图，见图2。 图2系统适用性试验比对溶液图谱 图1 系统适用性试验溶液典型图谱 2.3 异构体质谱确认 由于正相系统LC-MS污染较大，不宜直接进行LC-MS直接分析，故对该异构体进行制备：称取辅酶Q10约10mg，加正己烷10ml使溶解，？加入30%过氧化氢溶液2μl，置光照箱（2000 lx,温度30℃）放置48 h后，供试品中异构体和辅酶Q10色谱峰面积比例基本为1∶1。取该供试品溶液按上述色谱条件分离，收集异构体馏出液，然后取该馏出液直接进质谱进行确认结构，同时取辅酶Q10对照品进行质谱分析。结果见图3~4和表1。由表1可知，其一级质谱的精确分子量和二级质谱的精确分子量基本一致，由此确认该RRT0.9色谱峰为辅酶Q10的异构体。 图3 辅酶品谱 图4 辅酶构体谱 表1 辅酶Q10对照品和异构体级质谱和二级质谱数据 一级质谱级质谱 辅酶Q10 886.6740 218.0542，257.0780 272.1019，325.1385 异构体 218.0547，257.0776 272.1023，325.1394 2.4 不同品牌色谱柱耐用性考察 由于不同品牌的色谱柱对异构体的分离差异较大，且同时进一步验证自制系统适用性试验溶液中的异构体与USP对照品中的异构体保留时间一致。分别采用LUNA SILICA（4.6mm×250mm，5μm）、Hypersil SiO2（4.6mm×250mm，5μmAgilent RX-SIL（4.6mm×250mm，5μm LUNA SILICA Hypersil SiO2 Agilent RX-SIL 自制 USP 自制 USP 自制 USP 异构体 9.45 9.49 6.44 6.39 8.55 8.54 辅酶Q10 10.78 10.80 7.13 7.11 10.22 10.20 RRT 0.88 0.88 0.90 0.90 0.84 0.84 3 讨论 本研究在辅酶Q10现行标准中增加异构体检查方法的系统适用性试验后，能使其对原料药或制剂中异构体检查更为准确。 鉴于测定方法同原方法，故未进行方法学的相关验证。 参考文献 [1] 万艳娟，吴军林，吴清平. 辅酶Q10生理