QB-B5601-2021口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定.docx
ICS71.100.40
CCSY43
QB
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5601-2021
口腔清洁护理用品牙膏和口腔清洁护理液
中溶菌酶抗菌活性的测定
Oralcareandcleansingproducts—Determinationoftheantibacterialactivity
ofenzymesintoothpastesandoralrinses
2021-05-17发布2021-10-01实施
中华人民共和国工业和信息化部发布
QB/T5601-2021
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。
本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SAC/TC492/SC1)归口。
本文件起草单位：江苏雪豹日化有限公司、黑龙江省轻工科学研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。
工
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QB/T5601-2021
口腔清洁护理用品
牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定
1范围
本文件描述了牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性测定的术语和定义、方法要点、试剂与标准物质、仪器与设备、测定步骤和结果表示。
本文件适用于牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的定性测定。
注：本文件所指牙膏和口腔清洁护理液指以二氧化硅为基质或者以二氧化硅为主复配其他摩擦剂的牙膏和口腔清洁护理液产品，不包括以月桂醇硫酸酯钠为发泡剂的产品。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T35919口腔清洁护理用品分类和术语
3术语和定义
GB/T35919界定的术语和定义适用于本文件。
4方法要点
利用溶菌酶专一性水解敏感菌(溶壁微球菌)细胞壁的特点，以活性染料共价标记的细菌细胞壁为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细菌细胞壁完整性遭到破坏时，琼脂板上会形成清晰的透明圈，从而定性鉴定在膏体及溶液中的溶菌酶活性的存在。
5试剂与标准物质
5.1除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682规定的三级水。
5.2溶菌酶标准品：蛋清lysozyme,酶活力≥20000U/mg,CAS号12650-88-3。
5.3冻干色源底物：按照附录A规定的方法制备。
5.4琼脂粉：BR级生物试剂。
5.5氢氧化钠。
5.6磷酸二氢钠(NaH?PO4·2H?O)。
5.7磷酸氢二钠(NazHPO4·12H?O)。
5.80.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5):
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QB/T5601-2021
——溶液A(0.2mol/L磷酸氢二钠):称取71.46g磷酸氢二钠(5.7),用水溶解并定容至
1000mL;
——溶液B(0.2mol/L磷酸二氢钠):称取31.21g磷酸二氢钠(5.6),用水溶解并定容至1000mL;
——将32mL溶液A与68mL溶液B混合，使用时用去离子水稀释1倍，即为0.1mol/LpH6.5磷酸盐缓冲液。
5.91%冻干色源底物溶液：称取0.1g冻干色源底物，加入10mL磷酸盐缓冲液(5.8)中，充分混匀后备用。
5.102%琼脂溶液：称取2g琼脂粉于250mL三角烧瓶中，加入100mL水，备用。
6仪器与设备
6.1高速离心机：转速不小于8000r/min。
6.2电子天平：精度0.001g。
6.3恒温培养箱。
6.4灭菌锅。
6.5电炉。
6.6冰箱。
6.7超净工作台。
6.8微量移液器两支：20μL～200μL、100μL～1000μL。
6.9移液枪头：20μL～200μL移液器配套枪头、100μL～1000μL移液器配套枪头。
6.10打孔器：φ10mm。
6.11培养皿：φ90mm。
6.12离心管：5mL、50mL。
6.13三角烧瓶：250mL。
6.14容量瓶：1000mL。
6.15精密试纸：pH6.4～8.0。
7测定步骤
7.1灭菌
将培养皿、打孔器、离心管、移液枪头分别用牛皮纸包好放入灭菌