鸭细小病毒04-Nb株分离鉴定、基因组测序及VP2蛋白的表达的开题报告.docx

鸭细小病毒04-Nb株分离鉴定、基因组测序及VP2蛋白的表达的开题报告

开题报告

论文题目：鸭细小病毒04-Nb株分离鉴定、基因组测序及VP2蛋白的表达

一、研究背景和意义

鸭细小病毒（DUKV）是一种属于小型病毒科的病毒，能够感染禽类动物，导致其产蛋量下降、蛋壳薄弱等问题，造成了农业生产上的严重损失。在中国，鸭细小病毒的感染情况比较常见，且病毒的自然滞留库较为广泛，因此该病毒的传播和控制成为了重要的研究方向。

近年来，随着分子生物学技术的发展，病毒的分离、鉴定和基因组测序技术得到了普及和推广，为研究病毒的生物学特性和基因功能提供了更为可靠和有效的手段。因此，本研究旨在分离、鉴定和基因组测序鸭细小病毒并进行VP2蛋白的表达分析，为深入了解该病毒的特点和功能提供有力支持，为针对该病毒的防治提供理论依据。

二、研究内容和方法

（一）研究内容

1.鸭细小病毒04-Nb株的分离和鉴定；

2.鸭细小病毒04-Nb株的基因组测序和生物信息学分析；

3.菌体复制蛋白VP2的表达与纯化。

（二）研究方法

1.样品采集和病毒分离

采用传统细胞培养法和PCR检测法，对感染鸭细小病毒的鸭类组织和粪便进行病毒分离和鉴定。

2.基因组测序和生物信息学分析

利用IlluminaMiSeq测序仪对鸭细小病毒04-Nb株进行基因组测序，并对测序数据进行生物信息学分析和比对。

3.菌体VP2的表达与纯化

通过PCR扩增出鸭细小病毒04-Nb菌体复制蛋白VP2基因片段，将其克隆到表达载体中，并利用大肠杆菌系统进行表达和纯化。

三、预期研究成果

1.成功分离并鉴定出鸭细小病毒04-Nb株；

2.完成鸭细小病毒04-Nb株的基因组测序和生物信息学分析，并获得相关数据；

3.成功表达和纯化出菌体复制蛋白VP2。

四、研究难点和风险评估

1.鸭细小病毒株的分离和鉴定需要耗费大量时间和精力，且样品来源、繁殖条件等因素对实验结果具有一定影响。

2.基因组测序和生物信息学分析需要大量的测序数据和分析软件支持，具有一定技术难度和复杂性。

3.菌体VP2的表达和纯化需要优化表达条件和纯化方法，且可能存在蛋白表达量不足、纯度降低等问题。

五、研究进度安排

1.文献调研和实验设计：3个月

2.样品采集和病毒分离：2个月

3.基因组测序和生物信息学分析：4个月

4.菌体VP2的表达与纯化：4个月

5.结果分析和论文撰写：3个月

六、参考文献

1.CavanaghD.Coronavirusavianinfectiousbronchitisvirus.VetRes.2007;38(2):281-297.

2.LiuM,ChenS,ChenYF,etal.Reappraisaloftheevolutionofvesiculovirusesbasedonwhole-genomecomparativeanalysis.PLoSONE.2016;11(6):e0155305.

3.MacLachlanNJ,DuboviEJ.FennersVeterinaryVirology.ElsevierHealthSciences;2016.

4.SmithDB,SimmondsP,JameelS,etal.ConsensusproposalsforclassificationofthefamilyHepeviridae.JGenVirol.2014;95(Pt10):2223-2232.

5.ZhaoY,ZhangH,ZhaoJ,MengC.DevelopmentofadiagnosticassayforduckTembusuvirususingTaqManprobe.JVirolMethods.2017;243:101-104.