卵泡直径对猪卵母细胞胞质成熟的影响-生物学;发育生物学专业论文.docx

Classified Classified Index： U．D．C： Dissertation for the Master Degree in Science EFFECT OF F OLLICLE DIAMETER ON PORC烈E OOPLASMIC MATI瓜ATION Candidate： Liu Zhongfeng Supervisor： Prof．Liu Zhonghua Academic Degree Applied for：． Master of Science Speciality： Development Biology Date of 0ral Examination： May，201 1 j r University： Northeast Agricultural University 目目 目 目 录 中文摘要 I 英文摘要 III l j；I言 ．．1 1．1卵泡与卵母细胞 。l 1．1．1卵泡发育与卵母细胞成熟 l 1．1．2卵泡直径与卵母细胞发育能力的研究进展 ．．2 1．2胞质成熟的研究现状 3 1．3线粒体与卵母细胞胞质成熟 4 1．4谷胱甘肽与卵母细胞胞质成熟 4 1．5卵丘与猪卵母细胞成熟、受精、发育 5 1．5．1卵丘与卵母细胞成熟 5 1．5．2卵母细胞成熟过程中COC的形态改变 6 1．5．3卵丘扩展相关基因研究进展 7 1．6研究目的和意义 9 2材料与方法 ．．． ．10 2．1卵母细胞的分组收集 ．10 2．2卵母细胞成熟培养 ．10 2．3孤雌激活及体外发育 10 2．4绝对定量PCR法检测单卵内线粒体含量 ．．． 1l 2．4．1标准曲线制作 11 2．4．2线粒体含量检测用单卵准备 12 2．5卵母细胞谷胱甘肽含量检测 12 2．6 Realtime．PCR检测卵丘卵母细胞相关基因表达 14 2．6．1 RNA提取用样品准备 ．．． 。l 4 2．6．2 RNA提取 。l 5 2．6．3 I玳A反转成cDNA 1 5 2．6．4 Realtime．PCR ．．16 2．6．5 Realtime PCR引物设计合成 16 2．6．6 Realtime．PCR结果相对表达量的分析 16 2．7统计分析 ．16 3结果与分析 18 3．1卵泡直径对猪卵母细胞体外核成熟及孤雌发育的影响 18 3．2卵丘扩展 1 8 3．2．1不同直径卵泡来源的卵丘卵母细胞复合体成熟培养前后卵丘状态比较 ．18 3．2．2卵丘扩展相关基因在卵丘细胞中表达 ．18 3．2．3转化生长因子家族基因在卵丘卵母细胞中的表达分析 19 东北农业人学理学硕士学位论文3．3绝对定量PCR检测卵母细胞线粒体拷贝数 东北农业人学理学硕士学位论文 3．3绝对定量PCR检测卵母细胞线粒体拷贝数 22 3．3．1线粒体标准曲线制作 22 3．3．2卵母细胞线粒体拷贝数分析 ．23 3．4卵母细胞谷胱甘肽含量检测 。23 4讨论 27 4．1卵泡直径与卵母细胞体外发育能力 27 4．2卵泡直径对卵丘扩展的影响及调控机制 ．27 4．3卵泡直径与卵母细胞胞质成熟 ．29 4．3．1胞质成熟与线粒体拷贝数 29 4．3．2胞质成熟与谷胱甘肽含量 ．29 5 l；{i论 ． ．．3 l 致谢 ．．．3：! 参考文献 ．33 9付录 ．38 攻读学位期间发表的学术论文 ．．． ．42 II CONTENTS CONTENTS CONTENTS Chinese Abstract ．I English Abstract ．．III 1 Introduction。 。 ．．． 。 J 1．1 Follicle and oocyte development ．1 1．1．1 Follicle development ．．1 1．1．2 Realtionship between folicle size and oocyte development 2 1．2 Ooplasmic maturation 3 1．3 Mitochondria and ooplasmic maturation ．4 1．4 GSH and ooplasmic maturation of porcine oocytes 4 1．5 Cumulus expansion and porcine oocytes maturation fertilization and development ．5 1．5．1 Cumulus expansion and maturation of porcine oocytes 5 1．5．2 Morphological changes ofcumulus--oocyte complexes during