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干扰素制备的工艺流程1.ppt

发布:2017-12-12约1.3千字共13页下载文档
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基因工程药物的制造实例 什么是干扰素? 概念(interferon,IFN):机体免疫细胞产生的一类细胞因子,是机体受到病毒感染时,免疫细胞通过抗病毒应答反应而产生的一组结构类似、功能接近的生物调节蛋白。 干扰素的作用? 一、抗增生作用:这是干扰素能用于治疗多种肿瘤的原因。 二、抗病毒作用:当我们的机体感染病毒时,体内会产生大量的干扰素。 三、免疫调节作用 四、抗纤维化作用 五、干扰素还有抗新血管增生、促进细胞凋亡等多种功能 干扰素是目前最主要的抗病毒感染和抗肿瘤生物制品。 · 干扰素的合成 一、基因工程菌的组建 1、如何构建基因工程菌?也就是DNA重组克隆单元操作步骤。 切、接、转、增、检 2、切之前还需要做什么? 获取目的cDNA 1、干扰素cDNA的获得 产生干扰素的白细胞 全RNA 5%~23%蔗糖密度梯度离心提取12 S mRNA 12S mRNA 什么叫12 S mRNA? 反转录成cDNA 寡dT—纤维柱 mRNA 接 目的cDNA 产 检 增 转 切 干扰素 2、基因工程菌的组建 pBR322质粒 抗性筛选? 大肠杆菌K12 用已知干扰素DNA片段作为探针挑选 Tcr Apr Tcr Tcr 受体菌的抗性筛选 ?步骤一:将细菌涂布到含四环素的培养基上培养,就可得到质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落。??????????? 步骤二:若想进一步筛选出重组子,可采用负选择(详情请看《基因工程》P59)。 但由于生产中要用已知干扰素DNA片段作为探针挑选富有干扰素的cDNA克隆,所以不需要进行负选择。 二、基因工程干扰素的制备 制备基因工程ɑ-干扰素工艺流程如下: (P73) 启开种子 制备种子液 精提 粗提 发酵培养 半成品制备 半成品检定 分装 冻干 成品检定 成品包装 制备的过程及要求: (1)发酵 (2)产物提取纯化 (3)质量控制标准和要求(P74) 小故事 抉择  一个农民从洪水中救起了他的妻子,他的孩子却被淹死了。   事后,人们议论纷纷。有的说他做得对,因为孩子可以再生一个,妻子却不能死而复活。有的说他做错了,因为妻子可以另娶一个,孩子却不能死而复活。   我听了人们的议论,也感到疑惑难决:如果只能救活一人,究竟应该救妻子呢,还是救孩子?   于是我去拜访那个农民,问他当时是怎么想的。 他答道:“我什么也没想。洪水袭来,妻子在我身过,我抓住她就往附近的山坡游。当我返回时,孩子已经被洪水冲走了。”   我琢磨着农民的话,如果当时这个农民稍有迟疑,可能一个都救不了;所谓人生的抉择不少便是如此。   感悟:很多事情根本没有错与对,也容不得你去细想错与对,如果过于犹豫或过于在乎别人的想法,你可能什么事也做不成。 * * * *
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