RNAi抑制PDE5A3基因治疗勃起功能障碍的实验研究课件.ppt

体外研究：将成功构建的重组腺病毒载体转入培养的人阴茎海绵体平滑肌内并检测其效应 荧光显微镜下观察转染效果 RT-PCR 和Western blot 分别检测重组腺病毒对 PDE5基因在mRNA和蛋白水平的表达抑制效果 在不同时间点检测细胞内cGMP、Ca2+的变化 组别 24h (FI) 48h(FI) 72h(FI) 实验组 829.3±7.8* 801.5±9.5 * 856.3±8.7 * 阴性对照组 1106.3±10.8 1121.3±10.2 1058.5±12.1 空白对照组 1076.6±9.7 1133.4±11.2 1104.3±10.5 rAd-siRNA-PDE5A3对正常大鼠勃起功能的影响 rAd-siRNA-PDE5A3对糖尿病ED大鼠勃起功能的影响 组别 例数 MIP MAP MIP/MAP 勃起持续时间 （mmHg） （mmHg） （%） （S） 实验组 9 81.4±13 111.6±6 72.9±2 ﹡ 39.6±12﹡ 阴性对照组 9 72.1±13 123.6±3 58.3±4 18.6±4 空白对照组 9 71.9±9 125.4 ±3 57.3±3 16.6±6 结果（八）：rAd-siRNA-PDE5A3抑制了糖尿病ED大鼠阴茎组织中PDE5A3基因mRNA的表达 结果（九）：rAd-siRNA-PDE5A3抑制了糖尿病ED大鼠阴茎组织中PDE5A3基因蛋白的表达 * * RNAi抑制PDE5A3基因治疗勃起功能障碍的实验研究 研究背景（一） ED基因治疗的优点: 阴茎血管平滑肌更新速度缓慢，因此基因治疗ED作用持续 时间长久，勿需如口服药物一样必须在每次性交前服用； 阴茎位于体表，基因转移操作方便； 阴茎静息状态时血流缓慢，仅5ml/min，便于充分吸收，转 染效率高； 阴茎为身体终末器官，易于暂时阻断阴茎血流，基因治疗时 选择性高、特异性好、安全、对身体其它系统损害较小。 研究背景（二） 用于勃起功能障碍基因治疗的分子靶点 超氧化物歧化酶 降钙素基因相关肽 脑神经营养因子 血管内皮生长因子 胰岛素样生长因子 离子通道:钾离子通道、钙离子通道的相关调节基因 左旋精氨酸–一氧化氮–环磷酸鸟苷通道的分子靶点: 一氧化氮合酶（基因增补） 磷酸二酯酶 （基因抑制） …… 研究背景（三） McCarthy HO, Coulter JA, Robson T, et al. Gene therapy via inducible nitric oxide synthase: a tool for the treatment of a diverse range of pathological conditions. J Pharm Pharmacol. 2008 Aug;60(8):999-1017. Bivalacqua TJ, Deng W, Kendirci M, et al. Mesenchymal stem cells alone or ex vivo gene modified with endothelial nitric oxide synthase reverse age-associated erectile dysfunction.Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007 Mar;292(3):H1278-90. Lin G, Hayashi N, Carrion R, et al.Improving erectile function by silencing phosphodiesterase-5.J Urol. 2005 Sep;174(3):1142-8. 白文俊，侯树坤，王晓峰等. PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞CNMP的影响. 中华男科学. 20