现代仪器分析-HPL.ppt

蒸发光散射检测器ELSD应用030201散射光强只与溶质颗粒大小和数量有关，而与溶质本身的物理和化学性质无关，ELSD属通用型和质量型检测器。适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测。（糖类，甾体皂甙，脂肪酸等）其灵敏度与载气流速、汽化室温度和激光光源强度等参数有关。它的基线漂移不受温度影响，信噪比高，也可用于梯度洗脱。（三）荧光检测器

（fluorescencedetector）高灵敏度、高选择性；能在紫外光激发下能产生荧光的物质。多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；（四）示差折光检测器

（differentialrefractiveindexdetector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；01记录仪+工作站02仪器性能指标03分离性能：流量精度，噪声，漂移，线性04检测性能：比如UV有波长的准确度五数据处理系统涡流纵向传质阻力01基本理论及色谱流程与气相色谱法相似；如塔板理论、速率理论、保留值、分离度等都可用于高效液相色谱法。两者不同的是流动相，因而在基本理论方面需要考虑这些特点。其影响最大的是速率理论。02描述其板高与影响因素关系的范氏方程如下：H＝A＋B/u＋Cu03第三节高效液色谱法的基本理论但在液相色谱中流动相是液体，黏度大，柱温低，扩散系数小，所以B/u很小可以忽略，则：H＝A＋Cu因此：从A项考虑：A=2λdp减小dp，小粒固定相，可以提高柱效；降低λ采用球形，颗粒均匀分布的固定相，有利于提高柱效；从C项考虑：在HPLC中：C=Cm+Csm+Cs通常采用化学键合相，固定液被键合到载体的表面。所以C=Cm+CsmH＝A+Cm+Csm范式方程提高柱效的方法：减小dp，采用球形小粒固定相，化学键合相低黏度流动相，低流量（1ml/Min）柱温25-30排阻色谱色谱06离子对色谱05离子色谱04离子交换色谱法03液-固吸附色谱法02、液-液分配色谱法01第四节各类高效液色谱法一、液-液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，采用化学键合固定相正相分配色谱亲水性固定液+疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性；分离物质：强极性化合物（糖类和多肽类）；极性大的后出峰；氰基化学键合相：诱导力，分离可极化的物质氨基化学键合相：诱导力+氢键作用力反相分配色谱疏水性固定液+亲水性流动相，流动相的极性大于固定液的极性。分离物质：非极性化合物（广泛）；极性小的后出峰；十八烷基键合相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（ODS反相柱）。疏溶剂理论：烃基键合相，强疏水性，组分中非极性部分与烃基键合相结合。亲水性流动相使组分分离。二、液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography0504020301固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用：分离相对分子质量中等的脂溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；离子交换色谱

ion-exchangechromatography固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；早期采用的离子交换树脂被离子键合相代替。流动相：阳离子离子交换色谱，采用碱性水溶液；阴离子离子交换色谱，采用酸性水溶液；04030102基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-应用：离子及可离解的化合物，有机和无机分离，氨基酸、核酸等。四、离子色谱

ionchromatography（IC）离子色谱是与离子交换色谱的区别：采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方