凝胶层析法1.pdf

生药 凝胶层析 1 生药 • 凝胶层析（gel chromatography ）也称： 分子筛层析 分子排阻层析 凝胶过滤 凝胶色谱等 是指混合物随流动相经过凝胶层析柱时，由于 各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分 得以分离的层析方法。 生药 简介 凝胶色谱是以各种多孔性凝胶填料为固定 相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量 不同而达到物质分离的一种技术。 突出优点是：凝胶不带电荷、吸附力弱、不 需再生处理可反复使用、操作条件温和、对分离 成分不变性和破坏、对高分子物质有很好的分离 效果。 生药 凝胶层析的应用范围： 凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、 多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大 小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶 床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子 筛特性，可对这些物质的溶液进行脱盐、浓 缩、去热源和脱色。 生药 第一节 凝胶层析的基本原理 凝胶层析的分离过程是在装有 多孔物质填料的柱中进行的。 柱的总体积为V ，它包括填料 t 的骨架体积V ，填料的孔体 GM 积V ( 内水体积) 以及填料颗粒 i 之间的体积V （外水体积）。 0 V = V + V + V t i 0 GM 5 生药 1、外水体积：指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，即 凝胶颗粒间液体流动相的体积。（用Vo表示） 2、内水体积：指凝胶颗粒中孔穴的体积，即凝胶层析中 固定相体积。（用Vi表示） 3、骨架体积：指凝胶颗粒实际骨架体积。 （用V表示） GM 4、柱的总体积：指凝胶柱所能容纳的总体积。（用V表 A 示） 5、洗脱体积：指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液 的体积。（用Ve 表示） 生药 流动相体积 固定相体积 总体积 则： Vt=Vo+Vi+Vg 生药 8 生药