三根祛瘤方对结肠癌SW480细胞环氧化酶2及核因子κB影响.doc

三根祛瘤方对结肠癌SW480细胞环氧化酶-2及核因子-κB的影响 　　摘 要:目的 探讨三根祛瘤方（简称三根方）对结肠癌细胞的作用机制。 　　方 法:采用不同浓度的三根方处理结肠癌SW480细胞后，以四唑盐比色试验检测细胞增殖，以western blot检测环氧化酶-2蛋白水平，采用凝胶迁移率法检测核因子-κB活性。 　　结 果:三根方对结肠癌SW480细胞增殖具有较强的抑制作用。三根方能抑制环氧化酶-2蛋白水平的表达及抑制核因子-κB活性，且呈浓度依赖性。 　　结 论：三根方能够抑制结肠癌细胞的恶性增殖，其机制与抑制环氧化酶-2基因的表达及核因子-κB活性有关。 　　关键词：三根方； 结肠癌细胞；环氧化酶-2；核因子-κB 　　Effect of Three Root Anticancer Prescription on Cyclooxygenase-2 and Nuclear Factor?κB of Colon Cancer Cell Line SW480 　　Objective:To study the effects of Three Root Anticancer Prescription（TRAP）on colon carcinoma cell line SW480. 　　Methods:After colon cancer SW480 cell were treated with TRAP, MTT assay, and Western blot, electrophoretic mobility shift assay were used to detect the suppression rate ,cyclooxygenase-2 protein, nuclear factor κBactivity.Results TRAP had a remarkable inhibition on colon cancer SW480 cell line. It could suppress cyclooxygenase-2 protein,and nuclear factor-Κb activity in a dose- and time-dependent manner.ConclusionTRAP can inhibit the growth of huamn colon cancer SW480 cell through inhibiting cyclooxygenase-2 protein and nuclear factor?κB activity. 　　Key words:Three Root Anticancer Prescription； colon cancer； cyclooxygenase-2； nuclear factor?κB 　　 　　三根祛瘤方（Three Root Anticancer Prescription，TRAP）（简称三根方）是中医药工作者从长期临床工作中总结出来的用于治疗恶性肿瘤的经验方，多年临床应用，发现可以抑制多种恶性癌细胞的恶性增殖，尤其是消化道恶性肿瘤。该方对小鼠移植瘤S180、H22肝癌、Lewis肺癌、艾氏腹水癌EAC和体外人MKN-45胃腺癌细胞均有一定的抑制作用[1～2]。但是抗癌机制尚不清楚。 　　本研究以结肠癌SW480细胞为模型，采用三根方处理，观察了其对环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）和核因子-κB (nuclear factor-κB，NF-κB)活性的影响。 　　 　　材料和方法 　　 　　1.材料三根方制剂，购自浙江中医学院制剂室。1g生药/ml。4C贮藏备用。结肠癌SW480细胞株，购自中国科学院生物化学和细胞生物学研究所。RPMI1640购自GIBCO BRL。 　　2.细胞增殖检测 结肠癌SW480细胞生长至对数生长期，收集细胞，制成单细胞悬液，按每孔1.5x 105/ml 0.1 ml接种到96孔培养板中。设空白对照组和不同浓度的实验组，设3复孔。采用四唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖。 　　3.细胞COX-2蛋白表达 采用Western Blot方法检测。药物处理48 h，收集细胞，提取细胞总蛋白。电泳上样蛋白量为50μg，200 mA 2 min转膜。转膜后凝胶染色证实转膜完全，一抗二抗反应后ECL盒显色拍照。阳性条带为72000bp。 　　4.细胞NF-κB活性 采用凝胶迁移率法检测SW480细胞NF-κB活性。以地高辛标记探针。其余步骤参照文献［3］进行。核蛋白定量后取5μg、DNA结合缓冲液17μL、标记探针1μL。总体积21μL，置37℃孵育30 min