DB32T 2605-2013 一品红种苗组培快繁技术规程　　.docx

ICS65.020.20B22

备案号：40491-2014

DB32

江苏省地方标准DB32/T2605-2013

一品红种苗组培快繁技术规程

TechnicalRegulationforTissueCultureandPropagationofEuphorbiapulcherrima

2013-12-20发布2014-01-20实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T2605-2013

前言

为规范一品红种苗的组培快繁方法，特制定本标准。

本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。本标准由江苏省农业科学院提出。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准主要起草人：叶晓青、佘建明、邓衍明、梁丽建、汤日圣、贾新平。

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DB32/T2605-2013

一品红种苗组培快繁技术规程

1范围

本标准规定了一品红种苗组培快繁的设施设备和操作流程。本标准适用于一品红组培苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T8321农药合理使用准则

GB/T19165—2003日光温室和塑料大棚结构与性能要求

3设施设备

3.1场地

选择交通便捷、地势平坦、光照充足、通风良好、水电配套、排灌便利的场地进行设施建设。

3.2主要设施

3.2.1准备室

用于玻璃、塑料器皿及其他实验用具的清洗、干燥和保存，药品的称量、溶解、配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌，以及植物材料的预处理、培养材料的观察分析等。

3.2.2接种室

放置超净工作台，开展植物材料的无菌操作，包括外植体的消毒、接种、培养物的转移和试管苗的扩繁、生根等。

3.2.3培养室

用于接种材料的无菌培养和观察，一般要求温度在25±2℃,光照强度1500Lux～3000Lux，光照周期12h/12h（光/暗）。

3.2.4温室

用于试管苗的炼苗、移栽和生长，根据实际情况可选择玻璃温室或薄膜温室，必须具备夏季可调节室内温度至32℃以下，冬季可调节室内温度至15℃以上的条件，可以喷水补湿，并且具有良好的防虫隔离条件。

设施建造按GB/T19165-2003中规定执行。

3.3主要设备

3.3.1准备室设备

蒸馏水器、冰箱、培养箱、天平、电热磁搅拌器、酸度计、高压蒸汽灭菌锅、烘箱。

3.3.2接种室设备

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DB32/T2605-2013超净工作台（水平送风）、双筒实体显微镜或生物显微镜、空调、紫外灯或空气净化装置。

3.3.3培养室设备

培养架、紫外灯或空气净化装置、空调、自动记录温度、湿度计。

4操作流程

4.1接种前准备工作

4.1.1培养基配制和灭菌

以MS培养基为基本培养基，添加琼脂6.0g/L～6.5g/L，蔗糖30g/L，调节PH值为5.6～5.8；

诱导愈伤培养基：MS+BA0.2mg/L～0.5mg/L+2.4-D2.0mg/L～3.0mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L；分化培养基：MS+BA0.5mg/L～1.0mg/L+NAA0.2mg/L；

芽增殖培养基：MS+BA0.1mg/L～0.5mg/L+NAA0.1mg/L～0.2mg/L；生根培养基为：MS+NAA0.1mg/L～0.3mg/L+IBA0.1mg/L～0.3mg/L。

培养基配制完毕后，分装至组培瓶中。在121℃下高压灭菌15min～20min，并尽快取出使其冷却备用。

4.1.2超净工作台消毒

接种前半小时用70%酒精喷雾、擦洗超净工作台；然后打开用紫外灯照射20min并通风。在点燃酒精灯的情况下严禁用酒精喷雾。

4.1.3接种人员的准备

4.1.3.1入无菌室前洗手，洗净指甲中的污物。

4.1.3.2入室时穿戴上经过消毒的工作服、帽子、口罩和鞋子等。

4.1.3.3操作前和操作中经常用70%酒精棉球擦手。

4.2外植体接种

4.2.1外植体选取和清洗

选择生长健壮、无病虫害的植株作为母株，以其幼嫩的叶片为外植体。

外植体在加有适量洗衣粉的自来水中浸泡后，用自来水冲洗20min～30min。

4.2.2接种工具的消毒

将刀和镊子等接种工具浸入95%酒精中，使用之前进行燃