5.5 药物代谢的研究方法.pdf

第五章 药物代谢 Drug Metabolism 第五节 药物代谢的研究方法  研究主要包括：代谢途径的推断、代谢产物的分离鉴定、 代谢速度和程度、参与的药物代谢酶，以及药物对代谢酶 的诱导或抑制作用等。  包括体内和体外方法 一、体外法 特点： 1.可排除干扰，直接观察到代谢酶对底物的选择性代谢，为体内 代谢研究提供重要的线索和依据； 2.对利于对体内代谢转化率低且缺乏灵敏检测手段的药物检测； 3.快速简便，适合于大批量药物筛选； 4.减少样品和实验动物数，降低研究费用； （一）离体肝灌流法：是利用离体的新鲜肝脏做的实验，在一定 程度上保留了肝细胞结构和功能的完整性，同时又能排除其他 脏器的干扰，动态地监测肝脏对药物的处置。 （二）肝细胞培养法：通过制备的肝细胞辅以氧化还原型辅酶， 在模拟生理条件下进行生化反应。HepG2表达部分代谢酶，但 不完整，HepaRG比较可靠的肝细胞替代品。 （三）过表达特定酶亚型的细胞系：利用基因转染技术构建表达 特定代谢酶的细胞系具有专一性强、便于高通量筛选的优点， 可以排除其他代谢酶等因素干扰。 （四）肝切片法：是指将新鲜肝组织用切片机切成一定厚度的切 片，实验时与药物共同孵育的方法。 （五）亚细胞片段法：是把组织的匀浆液采用差速离心法而制得。 该法易于操作，重现性好，特别适用于药物研究早期阶段的代谢 研究与高通量筛选，包括肝微粒体法和S9片段法。 （六）重组代谢酶：是利用基因工程及细胞工程将调控代谢酶表达 的基因整合到大肠杆菌或昆虫细胞，经细胞培养，表达高水平的 代谢酶，然后经过分离纯化得到纯度较高的单一代谢同工酶。 二、体内法 （一）药物探针法：有些药物经某一种同工酶代谢，则其清除率可 以作为该同工酶的活性指标。 （二）体内指标法：利用某些内源性物质及其代谢的水平变化，来 反映某些药物代谢酶或代谢途径的变化。 （三）基因敲除动物：利用基因敲除技术构建的代谢酶基因敲除动 物为药物代谢研究提供了一个与人体环境近似而又基于整体动物水 平的高通量筛选模型。