肿瘤组织和循环DNA基因突变检测的性能验证（verification）及性能确认（Validation）（包括NGS）.pptx

肿瘤组织和循环DNA基因突变检测的性能验证及NGS的性能确认(Validation)

李金明国家卫生计生委临床检验中心

全国临床分子检测质量保证大会2017.11.9-11.广州

?

Ø性能验证(verification)?

Ø临床实验室如何编写特定项目的性能验证的SOP及如何进行性能验证？

Ø什么叫LDTs？

Ø性能确认(validation)?

Ø如何做临床分子检测一般方法(实时荧光PCR、ARMS、数字PCR、HRM等)的性能确认？

Ø高通量测序(NGS)LDTs临床应用前如何进行性能确认？

Ø性能指标：

重复性(精密度)(定性和定量)

准确性(定量：回收率、标准物质等；定性：方法学比较等)

线性范围(定量)

分析特异性(定性和定量)

测定下限或分析敏感性(定性和定量)

抗干扰能力(定性和定量)

试剂方法的性能验证(verification)

Ø“verification”：broadlyas“confirmationthroughtheprovisionofobjectiveevidence,thatspecifiedrequirementshavebeenfulfilled”.(广义为通过提供客观证据证明特定的要求得到满足)

ØCLIAusestheterm“verification”：specificallytorelatetoconfirmationthatthelaboratoryusingatestcanreplicatethemanufacturer’sperformanceclaimswhenthetestisusedaccordingtothepackageinsert.(CLIA性能验证术语特指使用某特定检测试剂或系统的实验室按照所提供的试剂盒或检测系统说明书使用时，能复现生产厂家所宣称的检测性能。)

“性能验证”(“verification”)定义

cobas®DNASamplePreparationKit24Tests

cobas®cfDNASamplePreparationKit24Tests

cobas®EGFRMutationTestv224Tests

cobas®EGFRMutationTestv2

P/N:05985536190

P/N:07247737190

P/N:07248563190

Forinvitrodiagnosticuse

组织标本的EGFR检测

EGFRExon

EGFRMutation

TargetNucleicAcidSequence

LowestAmountofDNA(ng)in5%MutantPanelMemberperreactionwelltoachieve之95%“MutationDetected”Rate(N=72replicates)

18

G719A

2156GC

3.13

19

Exon19

Deletion

2235-2249del15

0.78

20

S768I

2303GT

0.78

20

T790M

2369CT

3.13

20

Exon20

Insertion

2307_2308ins9(GCCAGCGTG)

3.13

21

L858R

2573TG

0.78

分析敏感性(质粒)

SixDNAplasmidconstructscontainingthemostfrequentlyobservedmutationforeachmutationclassdetectedbythetestwere

blendedwithwild-typecelllineDNAtoatargetedfinalcompositionof5%mutantsequencebasedongenomicDNAequivalents.

Serialdilutionsofthe5%mutantsequencestockswerepreparedand24replicatesofeachpanelmemberweretested,usingeachof

3cobas®EGFRMutationTestkitlots.Analyt