咖啡因对猪精液冷冻的影响及冷冻-解冻方法的优化.pdf

·148· 遗传繁育 中国畜牧兽医 20lO年第37卷第10期 咖啡因对猪精液冷冻的影响及 冷冻一解冻方法的优化 张渭斌1，刘丑生2，孙世铎1，于福清2，赵俊金2，孟飞2。史建民2，谷合勇3 (1．西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100；2．农业部种畜品质监督检测中心， 北京l00193；3．云南农业大学动物科技学院，昆明650201) 摘要：本试验对猪精液冷冻保护液中添加咖啡因的作用进行了研究，并优化冷冻一解冻程序，提高0．5mL细管猪精液冷 冻解冻后的质量。在预先设计稀释液配方的基础上，使咖啡因终浓度为0、0．2、0．4、0．6 mg／mL，选择最佳咖啡因浓度，选出 s 精液解冻后精子品质的影响，最后对38℃下30s、50℃下13 2种解冻方法进行比较。结果表明，咖啡因浓度为0．2，0．4 mg／mL的精子冷冻后活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于0、0．6 mg／mI。(PO．05)，最佳添加浓度为0．2mg／ml。；预设计 浴解冻13s显著优于38℃解冻30s(P0．05)。 关键词：猪精液；咖啡因；冷冻曲线；冷冻速率 中图分类号：$814．4 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2010)10—0148—04 精液冷冻保存是为了充分发挥优良种公畜的遗 传潜力，延长精子的贮藏时间及维持受精能力，便于 为冷冻保护剂，采用低速离心的一次稀释法，简化了 长途运输，降低疾病的传播，加快畜群品种改良步伐 试验步骤，并以冻后精子活力、质膜完整率、顶体完 (徐振军等，2006)，同时也是建立动物精子基因库不整率作为评定指标，探讨咖啡因对猪精液的冷冻效 可缺少的手段，对动物种质资源的保存具有重要意 义。中国猪的品种资源丰富，冷冻优良种公猪精液 o 对于充分发挥良种猪的遗传品质和猪遗传资源的保 护具有重要意义。目前，猪精液冷冻保存技术仍没 果进行对比，同时对3种冷冻曲线及2种常用解冻 有得到大范围推广，国内外关于猪冷冻精液的研究 方法进行对比，为今后的研究提供理论依据(Gross— 报道很多，但在实践中应用的比率还是很低，国内应 feld等，2008)。 1材料与方法 用的更少(杜立银等，2009)，其主要原因是猪精液冷 冻后人工授精母猪的受胎率、产仔数等低于鲜精输 1．1猪精液来源公猪选用北京畜牧中心所属种 精和自然交配，严重制约了该技术在生产中的普及 猪场的大白猪，收集精液中段浓厚部分，经4层纱布 过滤，除去胶状物用DSBF猪精液稀释液在等温条 应用(Westendorf等，1975；Eriksson等，2000； 件下作1：1稀释，选择活力0．7以上，密度为“密” 收稿日期：2010—06一04 的保存于保温瓶中，1h内运回实验室。 作者简介：张渭斌(1985一)，男，陕西人，硕士生，主要从事动物1．2主要仪器泡沫盒、磁力搅拌器、程序冷冻仪 遗传育种与繁殖工作。 (Minitiib BX51)、 15M)、相差显微镜(Olympus 通信作者：刘丑生(1964一)，男．甘肃人，研究员，主要从