人的可溶性L-selectin(sL-selectin)在杆状病毒载体系统中的表达与纯化.pdf

复旦学报（医学版） ! !#$% %’( ) *+# ,-’ ##$ ,+. ，%% （ ） SRQ 人的可溶性!#$%$’()（#!#$%$’() ）在杆状病毒 载体系统中的表达与纯化 胡! 萍! 石必枝! 吴兴中! （复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系/卫生部糖复合物重点实验室! 上海! ###% ） 【摘要】! 目的! 利用昆虫细胞杆状病毒系统表达人的重组可溶性0/型选择蛋白配体凝集素（12$% 3+-425’%$%6 74858+ 0/7+8+-6’% ：70/7+8+-6’% ），探索在真核细胞中高效表达人的重组可溶性0/型选择蛋白配体凝集素的新途径。 方法! 将已经重组好的杆状病毒感染昆虫细胞，表达70/选凝素于细胞培养上清，利用末端连接的99/结构域 （蛋白: 来源的首尾相连的二聚化9 结构域）与;=/琼脂糖/$ 的结合而分离纯化，通过 ,,/?:=@ 鉴定分子量 的大小，并用特异性抗体验证，另外通过重组的70/选凝素与,**A’’( 的黏附观察其活性。结果! 70/选凝素 可在昆虫细胞中表达，产物的分子量约为)$ ### ，与人肝癌细胞,**A’’( 的结合率可达’#B 。结论! 70/选凝 素可通过杆状病毒载体在昆虫细胞中有效表达，分离纯化后依然保持生理活性。 【关键词】 ! 0/型选择蛋白配体凝集素；! 杆状病毒；! 99/结构域 【中图分类号】! C #%! ! 【文献标识码】! : *+,-$##(.) /)0 ,1-(2(/’(.) .2 314/) -$.45()/)’ #.%15%$ !#$%$’() （#!#$%$’() ）56 5/1%.7(-1# $+,-$##(.) #6#’$4 I ?’% ，,I; J’/F1’ ，K L’%/F14%! （!# $%’(%)’(# ’* +,#-’. (’)/01 ，2/0/1)(# ’* 34,/- 5%,)67 8. %()90) ’* :/’-69/1)(# %0; 2’,-4,%( :/’,’# ， =6%06%/ 2-/-%, ’,, ，?4;%0 @0/A(1/)# ，=6%06%/ ###% ，6/0% ） 【85#’-/’ 】! 91-,.#$! D4 +E.3+77 3+-425’%$%6 12$% 70/7+8+-6’% ’% ’%7+-6 -+88 8’%+ (’$ 5$-84(’37 +E/ .3+77’4% 7M76+2 $%# 617 64 +E.843+ %+G G$M 4N +E.3+77 61’7 .346+’% ’% +O$3M46’- 7M76+2 G’61 1’1 +NN’-’+%-MH ! :$’3.0#! ;%7+-6 -+887 ,N* G+3+ ’%N+-6+# G’61 3+-425’%$%6 5$-84(’37 -4%6$’%’% 70/7+8+-6’% G1’-1 G+3+ 61+% .34#-+# $%# 7+-3+6+# 64 7.+3%$6$%6H D1+ .3’N’-$6’4% G+3+ .+3N432+# 5M 5’%#’% 4N 70/7+8+-6’% FF/6$ （1+$#/64/6$’8 #’2+3’F+# 9 #42$’% #+3’(+# N342 .346+’% : ）64 ;=/,+.1$347+H D1+ 7’F+ 4N 70/7+8+-6’% G+3+ ’/ #+%6’N’+# 5M ,,/?:=@ $%# 61+ .346+’% -4%N’