人感染h7n9禽流感标本采集要求.ppt
人感染H7N9禽流感
标本采集要求
吕昌武
牡丹江市疾控中心微生物检验科
国家流感监测网络实验室
提纲〔七个方面〕
人感染H7N9禽流感病毒的病原学
人感染H7N9禽流感监测病例定义
标本采集种类
标本采集主要器材和试剂
标本采集方法
标本的保存、运送
标本采集要求
人感染H7N9禽流感病毒的病原学
禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。
依据其外膜血凝素〔H〕和神经氨酸酶〔N〕蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型〔H1～H16〕和9个N亚型〔N1～N9〕。
人感染H7N9禽流感病毒的病原学
禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3。
此次报道的为全球首次发现人感染H7N9禽流感病毒。该病毒为H7N9和H9N2重配的新型病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒，基因序列分析说明为禽源病毒。
人感染H7N9禽流感监测病例定义
同时具备以下4项条件
1、发热(腋下体温≥38℃)；
2、具有肺炎的影像学特征；
3、发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；
4、不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
除第4条不同于不明原因肺炎病例定义，以上三条均相符。不明原因肺炎第4条为：经标准抗菌药物治疗3－5天，病情无明显改善或呈进行性加重。
标本采集种类
医疗机构应当及时采集病例相关临床样本。
1、上呼吸道标本〔包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液〕；
2、下呼吸道标本〔如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本〕
3、血清标本〔发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清〕；
4、尸检标本〔如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集肺组织、气管、支气管等组织标本〕；
5、应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本〔尤其是下呼吸道标本〕。〞发烧72小时标本〞
标本采集主要器材和试剂
1、拭子：WHO及美国CDC规定，鼻烟拭子采集只能用塑料杆的涤纶或人造棉拭子〔如常用的聚酯纤维拭子〕，不能用藻酸钙拭子或木杆拭子，因可能使某些病毒失活或抑制PCR；脱脂棉含有荧光物质，影响实时应荧光定量PCR结果。
标本采集主要器材和试剂
2、压舌板
3、3mlHank’s液螺口采样管
4、封口袋
5、冷藏运输包
6、油性标记笔或标签纸
7、样品登记表
8、真空采血管
9、个人防护装备
标本采集方法
标本采集方法
1鼻拭子
采集标本时，嘱咐病人头部尽量保持不动，将聚酯纤维头拭子轻轻转动缓缓插入病人鼻孔至颚部(注意：不可太用力，但要尽量深，通常5cm以上)，停留数秒吸取分泌物，轻轻旋转取出拭子，置采样管折断手接触部位的塑料柄，使拭子浸泡至采样液中，旋紧管盖。
标本采集方法
2咽拭子
嘱咐病人放松，发“啊〞声，立即用压舌板压住病人舌前2／3，聚酯纤维头拭子适度用力屡次抹擦悬雍垂〔腭垂或小舌，见图〕后部咽后壁及双侧扁桃体，防止触及舌部，取出后置采样管，折断手接触部位的塑料柄，使拭子浸泡至采样液中，旋紧管盖。
标本采集方法
标本采集方法
标本采集方法
3、切记：咽拭子与鼻拭子采到一个Hank’s管〔2—3ml〕。如商品化采样管液体过多，采样前倒掉一局部，以提高病毒浓度及阳性率。聚丙烯拭子采样前不需用生理盐水湿润，以吸收更多的分泌物。
标本采集方法
4、漱口液标本：在病人发热72小时内尽早采集。先让病人咳嗽几声，将5-10ml无菌生理盐水〔不含青霉素〕倒入病人口中，让病人头向后倾并发出“噢〞的声音，反复几次。将漱口液吐入50ml带垫圈的螺口塑料离心管中，旋紧管盖。
标本采集方法
5、尸检组织标本：病人死亡后应尽早进行解剖，采集肺、气管、肾、脾、肝、心脏、脑、血凝块等组织和淋巴结等重要器官标本。每一采集部位分别使用不同消毒器械；每种组织应多部位取材，每部位应取20～50g，淋巴结2个，分别置于50ml带垫圈的无菌螺口塑料管中，立即置于-70℃以下保存或冷藏〔4～8℃〕送至有关实验室。尸检组织标本对于病原学研究非常重要，应尽量多采集。
标本的保存、运送
标识：油性记号笔或标签纸在采样管上标记标本名称、姓名、编号等；
包装：符合“生物平安相关规定〞所采集的标本首先用封口袋密封，周围最好包裹吸水缓冲材料，用第二个封口袋再次密封，放入带冰排的标本运输箱；
填写“不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表〞，送检表用另一个封口袋密封，不要与标本放到一起；
于24小时内送当地国家流感监测网络实验室检测，最迟不超过48小时，如果有-70℃冰箱，可长期保存。
标本采集要求
无菌操作：采样人员须以无菌操作采集各类标本。采集标本